病毒DNA提取试剂盒(磁珠法)说明书
磁珠法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
用于病毒核酸的提取、富集、纯化等步骤,仅限科研。
测定原理:
利用磁珠可结合核酸分子原理,通过磁棒将吸附有核酸的磁珠与其它组分分离,经清洗和洗脱后,即可得到高纯度的核酸。
检测方法的局限性:
本试剂盒提取结果的纯度和质量会受到检测仪器及人员的影响,且本试剂盒采用特殊配方洗脱液,会对吸光度值造成影响,检测提取效果不建议使用紫外分光光度计直接测量。
试剂盒内容:
预分装试剂盒:
组成 |
20T/盒 |
40T/盒 |
64T/盒 |
深孔板 |
5T/板X4板 |
10T/板X4板 |
16T/板X4板 |
蛋白酶K溶液 |
1支 |
1支 |
1支 |
5T/板规格孔位说明:
有效孔位:A-E排,1-6列;A1-A6为1组提取,其余排相似。
无效孔位:F-H排,7-12列;试剂空缺,无法使用。
10T/板规格孔位说明:
有效孔位:A-E排;A1-A6和A7-A12分别为1组提取,其余排相似。
无效孔位:F-H排;试剂空缺,无法使用。
非预分装试剂盒:
组成 |
50T/盒 |
100T/盒 |
裂解液 |
25ml/瓶x1瓶 |
25ml/瓶x2瓶 |
去蛋白液 |
25ml/瓶x1瓶 |
25ml/瓶x2瓶 |
漂洗液 |
25ml/瓶x1瓶 |
25ml/瓶x2瓶 |
磁珠 |
25ml/瓶x1瓶 |
25ml/瓶x2瓶 |
洗脱液 |
5ml/瓶x1瓶 |
5ml/瓶x2瓶 |
蛋白酶K溶液 |
1ml/管x1瓶 |
1ml/管x2瓶 |
储存条件:
该试剂盒置于室温(15-25℃)条件下可保存12个月
自备仪器:
16道全自动核酸提取仪。
样本准备:
1.样本类型:血清,血浆,唾液,各种拭子洗液,病毒保存液,细胞培养上清液等。
2.样本采集:用无菌容器采集样本,样品量不少于1ml。建议参照相关动物疾病诊断技术对应的国家标准或OIETerrestrialManual。
3.样本保存和运送:采集或处理好的待测样品在2-8℃保存应不超过24小时;若需长期保存,须放置-70℃以下冰箱,并应避免反复冻融。样本运送采用泡沫箱加冰袋密封运输。
使用方法:
预封装试剂盒使用方法:
1.取出提取深孔板进行检查,并在桌面轻叩数次使挂壁液体流下,然后小心撕下试剂盒铝封膜。2.取出蛋白酶K溶液,短暂离心后,使用移液器在第1/7列加入20ul。
3.取待测样本,使用移液器在第1/7列加入200-300ul。
4.将提取仪开机,等待提取仪自动完成定位复位动作。
5.将磁棒套插入深孔板第5/11列,再对准提取仪磁棒套安装孔位,与深孔板整体推送到仪器卡扣位置。磁棒套固定到位能明显感觉到阻尼感;将深孔板对准金属底板加热孔位,再将深孔板四角在金属底板4个圆形固定螺丝处按压安装固定,保证深孔板安装平整牢固。
6.按压提取仪Start键,仪器自动扫描二维码开始核酸提取。注意每个二维码只能进行一次提取操作,无法重复扫描。
7.提取完成后,仪器蜂鸣器持续鸣响,按压提取仪Start键,结束蜂鸣。将深孔板从金属底座上拿起略微抬高,与磁棒套整体取出仪器,将第6/12列中的洗脱液转移至无核酸酶EP管中,进行后续实验,或适当条件保存。
8.每次提取结束后,若需继续做下一板提取,必须对提取仪进行一次关机再开机操作,以使仪器再次完成定位复位定位,方可进行下一次提取。每次提取后,手动开关UV紫外开关,进行一次时长30min的UV紫外照射消毒后再进行下一次提取。
表1核酸提取仪提取步骤
步骤 |
名称 |
加热 |
孔位 |
体积/ul |
时间/s |
速度 |
温度/℃ |
1 |
移磁珠 |
否 |
5 |
500 |
/ |
高速 |
/ |
2 |
裂解结合 |
是 |
1 |
500 |
600 |
高速 |
80 |
3 |
去蛋白 |
否 |
2 |
500 |
60 |
高速 |
/ |
4 |
漂洗 |
否 |
3 |
500 |
60 |
高速 |
/ |
5 |
洗脱等待 |
否 |
/ |
/ |
120 |
/ |
/ |
6 |
洗脱 |
是 |
6 |
100 |
180 |
高速 |
80 |
7 |
弃磁珠 |
否 |
5 |
/ |
/ |
/ |
/ |
非预封装试剂盒使用方法:
1.取出试剂进行检查,并分别颠倒混匀各试剂,涡旋混匀磁珠。
2.使用移液器按表2的用量和位置分别在深孔板中加入试剂和待提取样本。
3.按预封装试剂盒使用方法在自动核酸提取上进行提取操作。注意每个二维码只能进行一次提取操作,无法重复扫描。
4.提取完成后,仪器蜂鸣器持续鸣响,按压提取仪Start键,结束蜂鸣。将深孔板从金属底座上略微拿起抬高,与磁棒套整体取出仪器,将第6/12列中的洗脱液转移至无核酸酶EP管中,进行后续实验,或适当条件保存。
表2深孔板加液表
位置 |
试剂加液量/孔 |
第1/7列 |
20ul蛋白酶K溶液;500ul裂解液;200-300ul样本 |
第2/8列 |
500ul去蛋白液 |
第3/9列 |
500ul漂洗液 |
第4/10列 |
空孔位,不加试剂 |
第5/11列 |
500ul磁珠 |
第6/12列 |
100ul洗脱液 |