I.用途

Si-WAX磁珠是涂有弱阴离子交换表面（WAX）的磁性硅纳米颗粒。磁珠适用于：

● 质谱分析（例如MALDI-TOF分析）和HPLC之前的样品制备和预分级

● 用于多种下游应用的蛋白质和肽分离，例如酶测定

● 去除洗涤剂

● 临床样本的分级，例如血清，血浆，组织，脑脊液，尿液和细胞裂解液

● 富集磷酸化蛋白质和多肽

Si-WAX磁珠可方便用于手动和自动化工作流程。在外磁场作用下，高磁强度的磁珠通常在1分钟内完全收集。快速和完全分离导致非常好的再现性，因为在洗涤步骤不会损失磁珠。此外，与基于柱子的离子交换色谱相比，蛋白质吸附、解吸和磁性收集的短暂孵育时间通常显著缩短，如HPLC。 Si-WAX磁珠适用于自动液体处理平台上的96孔微孔板。

II．原理

肽和蛋白质与Si-WAX磁珠表面上的阳离子基团结合，同时洗去杂质。在解吸缓冲液中洗脱后，纯化的肽和蛋白质可供下游使用。

III．提供的材料

● 预平衡溶液： 0.02 M bis Tris，pH 6，1M NaCl

● 吸附溶液：0.02 M bis Tris，pH 6

● 洗涤液：水（HPLC级）

● MALDI MS的解吸溶液1： 1% TFA水溶液

解吸溶液2： a）0.02 M bis Tris，pH 6，0.05 M NaCl

b）0.02M bis Tris，pH6，0.1M NaCl

c）0.02M bis Tris，pH6，0.15M NaCl

d）0.02 M bis Tris，pH 6，0.20 M NaCl

e）0.02M bis Tris，pH6，0.25M NaCl

对于缓冲系统，应考虑目标分子的pI。为有效吸附和解吸，吸附和解吸缓冲液的pH应至少比要结合的分子的pI低1个pH单位，但不应超过4个pH单位。

为分析体液如血清，建议在不同pH下测试其它缓冲系统，因为目标分子的pI是未知的。可选吸附缓冲液：

● 0.1%TFA（pH 3.0）

● 柠檬酸钠缓冲液，pH 3.5-4.5

● N-甲基哌嗪，20mM，pH 4.5-5.0

● 哌嗪，20 mM，pH 5.0-6.0

● bis Tris，20 mM，pH 5.8-6.4

● 双Tris丙烷，20 mM，pH 6.4-7.3

● 三乙醇胺，20mM，pH 7.3-7.7

对于相应的解吸附溶液（盐梯度洗脱），须加入0.05M、0.1M、0.15M、0.2M和0.25M NaCl，如上面的Tris缓冲液。

为了更好地处理，可使用0.01%吐温20或0.01%TX100的洗涤剂。但请注意，清洁剂可能会干扰质谱等下游应用。推荐使用高达8mM的正辛基葡糖苷（n-octylglucoside）进行血清分析。

IV.产品用途

本产品在2~8℃下保存至少1年。将磁珠储存在封闭的小瓶中避免干燥。不要冻结产品！使用前充分涡悬磁珠。可以使用您自己的缓冲/存储介质轻松更换此悬浮介质。磁珠可在pH2.5~13的范围内使用。

V.实验使用流程

1）反离子预平衡：涡旋 Si-WAX磁珠均匀悬浮，将20μl磁珠悬浮液转移至PCR管，磁分离去除上清。从磁铁上取下管子，加入200μl预平衡溶液并重新悬浮，磁分离弃上清，重复洗涤两次。

2）吸附缓冲液平衡磁珠：向磁珠中加入200μl吸附缓冲液，并重新悬浮磁珠，磁分离弃上清。吸附缓冲液重复洗涤两次。

3）蛋白质/肽的吸附：向洗涤过的磁珠中加入含大约10μg蛋白质或肽的样品，吸附溶液总体积100μl。在室温下轻轻摇动磁珠5分钟完成吸附，磁分离弃上清。加入200μl吸附液，洗涤磁珠，弃去上清液。重复洗涤三次。

4）解吸：

A）MS分析的解吸：向磁珠中加入100μl洗涤液并重悬（脱盐步骤），磁分离，弃上清液。向磁珠中加入10μl解吸附溶液1，重新悬浮，磁分离，取出液体至Eppendorf管进行进一步分析。

MALDI分析：通常，将1μl洗脱液和1μl适当MALDI-MS基质的饱和溶液混合（typically, alphacyano-4-hydroxy-cinnamic acid is used for peptides 4000 Da, sinapinic acid is used.）。在MALDI靶上点样1μl混合物产生可靠的光谱。

B） 在天然蛋白质条件下的解吸：将磁珠重新悬浮在20μl解吸附溶液2a （0.02M Tris，pH 6，0.05M NaCl）中。并在室温下孵育2分钟，磁分离并转移上清液。增加解吸溶液2的盐浓度b-e，该解析步。

5）4B步骤后的脱盐：如果在天然条件下解吸后需脱盐（4B），例如，对于质谱分析，推荐的蛋白质组学C3、C8或C18磁珠。