在生物样本中，自发荧光是背景荧光的常见来源。 一种提高可检测性的方法是使用时间分辨的发光试剂。 FluoBead-Eu荧光微球将Eu3+掺入有机配位化合物中。 FluoBeads-Eu荧光微球的标称直径为0.2 μm，可以不包衣或与链霉亲和素结合使用。 链霉亲和素蛋白标记的珠子可用于许多基于生物素/亲和素反应的测定中的抗原和DNA靶标的间接检测。.

1.产品特性

特征	羧基修饰	链霉亲和素修饰
名称	FluoBead-Eu-COOH	FluoBead-Eu-SA
组成	聚苯乙烯	聚苯乙烯
荧光	铕螯合物	铕螯合物
直径	0.2 μm	0.2 μm
固含量	1 %	1 %
添加剂	0.05% NaN3	0.05% NaN3
有效期	≥ 36 Mon	≥ 24 Mon
储存	不使用时请冷藏（2-8°C）产品，但不要冻结。直立存放并保持瓶子密封。请保存在原始的琥珀色瓶中，不要将其暴露在会使产品变质的光线下。用手或涡旋混合器轻轻颠倒混合产品。

注意：取用前，请先通过超声处理，摇动或涡旋混合均匀。在超声处理之前，将链霉亲和素标记的微球等分。避免珠子过度涡旋/超声处理，因为这可能会导致蛋白质损坏。

基于镧系元素螯合物（例如铕）的时间分辨荧光是最敏感的荧光。将铕螯合物掺入聚苯乙烯微球中为提供更高灵敏度的测定法提供了有效的手段。 铕螯合物的检测下限降低，并且获得的结果不受通常导致荧光干扰的因素的影响。使用直径为0.2μm的羧基修饰或链霉亲和素包被的FluoBead-Eu荧光微球，在基于颗粒的侧向流动分析中可实现高灵敏度。微球内部用铕螯合物染色，具有宽的斯托克斯位移，在356 nm处激发，在613 nm处发射，并具有约0.5毫秒的超长寿命。这是大多数荧光团的10,000到100,000倍。超长寿命使铕螯合物微球可广泛用于时间分辨荧光，包括侧流分析，核酸杂交，时间分辨荧光法和免疫/组织学研究。FluoBead-Eu荧光微球的使用比常规荧光团的检测极限降低了几倍，因其具更高荧光强度并消除了相对短暂的基质荧光的背景干扰。

? 羧基修饰或链霉亲和素包被的荧光微球；

? 最大的颜色亮度和饱和度，可实现最佳的检测灵敏度和可读性；

? 封装的染料可防止在水性介质中浸出；

? 免疫球蛋白G有效吸附或共价偶联以结合靶抗原；

? 铕螯合物具有较大的斯托克斯位移（激发在356 nm处激发，在613 nm处发射）。这提供了高灵敏度和低背景宽斯托克斯位移；

2.抗体偶联

2.1.羧基荧光微球偶联抗体

活化偶联缓冲液	50 mM MES, pH 6.0.
EDC溶液	200 mM EDC.（加19.2 mg的EDC到500 μL超纯水）
Sulfo-NHS溶液	200 mM Sulfo-NHS.（加21.7mg的Sulfo-NHS到500 μL超纯水）
封闭缓冲液	50 mM Tris, pH 8.0, 0.5% (w/v) casein (pH adjusted with 4 M HCl).

重要提示：请将荧光微球保持在黑暗中，即尽可能用铝箔包裹离心管。每克微球偶联60 mg抗体。

1. 将500μL荧光微球以1％（w / v）分装到2 mL低蛋白结合管中。

2. 加入1 mL活化偶联缓冲液并充分混合。

3. 以11,900×g离心7分钟。

4. 倒出上清液，并将微球重悬于1 mL活化偶联缓冲液中。上下吹打均匀混合，以免结块可见。

5. 重复步骤3和4。

6. 最后一次洗涤后，将微球重悬于1 mL活化偶联缓冲液中。

7. 超声处理30秒钟，确保微球不聚集。此时，可进行目视检查以确保微球不聚集。

注意：单个微球在400倍放大倍数下很难看到，并且会显示为朦胧的颗粒海洋。但是，在400倍放大倍率下很容易观察到聚集的微球。

8. 在使用前准备新配EDC和Sulfo-NHS试剂。

9. 向1 mL洗涤过的微球（来自步骤7）中加入12μL的200 mM EDC和120μL的200 mM Sulfo-NHS。

10. 在室温下振荡混合30分钟

11. 以11,900×g离心7分钟。

12. 倒出上清液，并将微球重悬于1 mL活化偶联缓冲液中–上下吹打均匀混合（将微球重悬后应看不到团块）。

13. 重复步骤11和12。

14. 最后一次洗涤后，将微球重悬于850μL活化偶联缓冲液中。

15. 将微球超声处理30秒，以确保微球是单分散的（请参阅步骤7）。

16. 在活化偶联缓冲液中制备浓度为2 mg / mL的检测用抗体。

17. 基于每克微球60 mg抗体的包被浓度，向850μL微球中加入150μL的2 mg / mL抗体。彻底混合。现总体积为1 mL。

18. 在室温下振荡混合2.5小时。

19. 在通风橱中，向微球悬浮液中添加15μL乙醇胺。涡旋并振荡混合30分钟以淬灭任何剩余的活性位点。

20. 以11,900×g离心7分钟。

21. 倒出上清液，并将微球重悬于1 mL封闭缓冲液中–上下吹打均匀混合，以使看不到团块。

22. 将微球超声处理30秒，以确保微球是单分散的（请参阅步骤7）。

23. 在室温下在振荡混合过夜。

24. 以11,900×g离心7分钟

25. 倒出上清液，并将微球重悬于1 mL封闭缓冲液中，并通过上下吸液彻底混合，以使看不到团块。

26. 重复步骤24和25。

27. 最后一次洗涤后，将微球重悬于0.5 mL封闭缓冲液中。现在，微球的含量为1％（w / v）。储存在4℃直到可以使用。

注意：请在5天内使用。

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