一、概述

Epoxy 活化琼脂糖磁珠（Magarose-Epoxy）是公司新开发的活化好的磁珠，它采用平均粒径为20-45μm 的6%高度交联琼脂糖凝胶，表面用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，用它合成的亲和磁珠，它避免蛋白之间位阻以及蛋白和填料的位阻干扰，使其同等配基下有更高载量，同时有更好的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒，抗体等大分子的物质，载量基本保持不变。可以在水相或者有机相中偶联，提供的该Epoxy 琼脂糖磁珠已经完全溶胀为即用凝胶磁珠。

二、产品特性

产品名称	Magarose-Epoxy，Magarose-A-Epoxy
货号	PMAG014，PMAG 015
磁珠浓度	25% (v/v) in 50% DMSO
配基密度	60~70 μmol Epoxy/ ml磁珠
介质	6%交联磁性琼脂糖
粒径	20-45μm
配体结合	20 mg BSA/ml磁珠
保存	2~8℃保存一年

注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。

三、使用方法

1.产品特点

w 偶联条件温和（pH8-10，温度4-45℃，时间1-16小时，可以在水相或有机相中偶联），偶联效率高（配基密度60-70 μmol/mL）。

w 磁珠不需要处理，直接计算合适的量用于偶联，缩短时间。

w 保存时间长，-20℃可以保存2年，不能够受潮。

w 刚性强，流速快(300 cm/h，100 kpa)。

w 可偶联含有氨基、巯基、羟基的多糖，蛋白，核酸，抗体等配基，应用范围广。

w 偶联后制备的亲和填料寿命长，流速快，特异性高。

2.蛋白偶联操作步骤

以用该Epoxy 琼脂糖磁珠偶联牛血清白蛋白（BSA）为例：

1) 取20 ml活化琼脂糖磁珠，磁分离，50ml去离子水洗涤三次。磁分离，去除上清。

2) 取BSA 100 mg 溶解于10 mL的pH9.0的 0.25M 碳酸钠缓冲液中。

3) 将BSA 溶液加入磁珠中混合，在摇床上振荡，25℃偶联6小时。

4) 然后加50 mg 甘氨酸，再反应6个小时封闭剩余的基团。

5) 偶联了BSA 的磁珠，用1 M NaCl 溶液洗3-5次，收集偶联后剩余的液体以及洗涤的溶液测定BSA 的总量，再用纯水洗涤磁珠3次，最后将磁珠保存在相应蛋白保存缓冲液中。

6) BSA 的偶联量为25 mg/ml. 计算方法：BSA 的吸附载量=（G0—G1）/V。

G0：BSA 总使用量，单位：mg；

G1：偶联反应后未偶联的 BSA 的量，单位：mg；

V：填料的体积，单位：mL；

注：该偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白，均能获得很好的偶联效果。偶联的物质如果是小分子的例如氨基酸或其他带-NH2、-SH、-OH等基团的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05M NaOH中配置成10-20mg的溶液，其他条件不变。也可以提高偶联的温度，这样可以偶联密度更高。

3.注意事项

1) 活化的磁珠现取现用，以免时间过长造成偶联活性降低。可以-20℃密封保存，这样可以保存放2 年。如果要偶联的蛋白不稳定，可在摇床上4℃振摇偶联12-16小时，以维持配基的活性。如果没有把握可以配相应浓度的配基溶液0.5-1mL，分别选择不同pH 及温度然后不加填料模拟偶联条件，到时间观察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶联效果就不好，这时可以稍微降低pH 或温度，同时可以加5%左右的甘油或PEG 保护蛋白,避免沉淀，总之对于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。

2) 偶联配基后尽快清洗磁珠，避免在高pH 条件中，配基失活。

3) 更稳定的配基可以直接溶解于NaOH 溶液或者碳酸钠溶液中进行偶联，温度可适当提高，偶联时间则相应缩短至1-4小时。

4) 偶联蛋白的最适pH 为可以在8.0-10 左右，在室温或4℃均可，温度与pH 的提高均能增加配基的吸附载量，根据蛋白的稳定选择合适的pH 和温度，偶联蛋白溶液的浓度为5-20 mg/ml。磁珠体积和配基溶液的体积为1：1.5 或者为1：2。

5) 偶联的缓冲液包括碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的物质。

6) 偶联的物质如果是小分子化合物，例如氨基酸或其他带-NH2、-SH、-OH 等基团的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05 M NaOH 中配置成10-20 mg/mL 的溶液，其他条件不变。也可以提高偶联的温度，这样可以偶联密度更高。

7) 在偶联中要把磁珠能混匀完全悬浮起来即可，避免剧烈搅拌使填料有小颗粒降低流速。

8) 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

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