一、概述

Homo-COOH是均匀的，单一化的超顺磁性1μm直径微球，由高度交联的聚苯乙烯和均匀分布的磁性材料组成。磁珠进一步涂覆有缩水甘油醚的亲水层，将氧化铁隐藏在其中。然后将羧基引入珠子的表面。小的1μm的Homo-COOH具有亲水性表面，可确保低特异性结合，优异的分散能力以及易于在各种缓冲液中处理。这些磁珠还具有高磁性迁移率和低沉降率，使其成为自动化分析的理想选择。 Homo羧基磁珠以水性悬浮液形式提供。

Homo-COOH羧基磁珠为各种生物磁分离，分子操作和亲和分离提供了出色的固体支持。它们的大小使它们特别适用于样品制备和核酸和蛋白质的处理。碳二亚胺用于活化 Homo -COOH羧基磁珠与伯胺酰胺键合。
双功能交联剂可用于将其他官能团如硫醇，胺，马来酰亚胺等引入珠子的表面。如果待结合的配体不含伯氨基官能团，则可以通过例如引入。使用5'-氨基修饰的寡核苷酸。请注意，寡核苷酸中的其他氨基基团可能在某种程度上与珠子上的羧酸基团反应，导致通过内部碱基偶联。

一旦与您的配体结合，磁珠可以添加到细胞裂解物或含有您的目标分子的其他悬浮液中。在短暂孵育以允许靶标的亲和捕获后，通过使用允许抽吸未结合材料的磁体将磁珠拉到试管的侧面。此外，磁性分离有助于洗涤和浓缩与磁珠结合的分离的靶标。 磁珠不抑制酶活性，并且可以直接包含在珠结合的靶分子的下游分析中。或者，可以用常规洗脱方法从磁珠上洗脱目标分子。

二、产品特性

Bead diameter:1 μm

Active chemical functionality:600 μmol/g beads

Concentration:10 mg/ml (7-12 x 109beads/ml)

Density:1.8 g/cm3

三、缓冲液

Coupling Buffer（偶联缓冲液）:

50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;

Coupling Agent（偶联试剂）:

EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide]；

Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)

Quench Buffer（淬灭缓冲液）:

TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;

Storage Buffer（储存缓冲液）:

TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.

四 Homo-COOH的使用

以下方案为配体与100μL的 Homo -COOH羧基磁珠的偶联方案。该方案可按需放大或缩小。强烈建议对珠子活化（EDC、EDC / NHS和pH）和偶联条件（配体浓度、偶联缓冲液、pH、反应体积和温育时间）进行优化。

注意：

■ 通过涡旋确保磁珠均匀悬浮。

■ 为获得最佳性能，在无胺偶联缓冲液中偶联，蛋白应为0.5?4mg / mL，寡核苷酸为20?100μM，不含其它蛋白。较高浓度的蛋白可灵活地优化反应体积。含tris、甘氨酸、醋酸盐或柠檬酸盐的缓冲液不能使用。

■ 含有0.01％的Triton X-100的50 mM MES缓冲液（pH 6.0）可用作活化和偶联缓冲液。当使用化学合成的寡核苷酸时，寡核苷酸末端应有5'-胺基以偶联磁珠。

■ 珠子含有0.5％SDS以稳定悬浮液。尽管非必须，但在所有缓冲液中包含0.01?0.05％Triton X-100或0.01?0.05％吐温20将防止珠粒凝结并改善分散特性。

偶联方案A：使用EDC的两步偶联

该方案被推荐用于将蛋白偶联到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亚胺（EDC）活化珠上的羧基以形成胺反应性中间体。除去EDC后，加入蛋白质配体并通过蛋白质上的伯胺与磁珠的活化羧基偶联。

1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。

2. 涡旋振荡重悬Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中，磁分离并吸弃上清。

3. 加入200μL偶联缓冲液，涡旋20秒洗涤磁珠，磁分离并吸弃上清。

4. 按步骤3再次清洗羧基磁珠两次。

5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC（50 mg / mL）。

6. 向磁珠中加入80μL偶联缓冲液和20μL新配的EDC溶液，混匀。室温孵育15分钟，磁分离并吸弃上清。

7. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠，磁分离并吸弃上清。

注意：该步骤应该快速进行，因为磁珠上的胺反应性中间体不稳定。

8. 向羧基磁珠加入100μL偶联缓冲液和50?400μg蛋白质或配体，涡旋混匀。

9. 室温下孵育30分钟。根据配体和浓度的不同，最佳孵育时间可能为0.5?4小时。

10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含有未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。

13. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。

14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。

偶联方案B：用sulfo-NHS替代两步偶联

该方案与上述方案类似，但使用NHS。可通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。

1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。

2. 涡旋振荡重悬 Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离吸弃上清。

3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。

4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。

5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC（50 mg / mL）。在使用前用偶联缓冲液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。

6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。涡旋混匀。

7. 室温下混匀孵育15分钟。磁分离并吸弃上清。

8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀，磁分离并吸弃上清。

9. 加入100μL偶联缓冲液和50?400μg蛋白或配体。涡旋混匀。在室温下连续混合孵育0.5?4小时。

10. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清液含未结合的配体，如果优化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。

13. 向羧基磁珠加入250μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。

14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。

偶联方案C：一步偶联

这是一个快速结合方案，在一个反应中同时加入羧基磁珠、EDC和配体。该方案最适合偶联寡核苷酸和小分子，当配体上的羧酸基团的激活不会影响后续实验时。

1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50?400μg蛋白或1?5nmol寡核苷酸进行偶联。放在冰上。

2. 涡旋振荡重悬 Homo-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分离吸弃上清。

3. 加入200μL偶联缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。

4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。

5. 从磁力架上取下EP管。在80μL偶联缓冲液中加入50?400μg配体。

6. 在室温下孵育30分钟。

7. 使用前用偶联缓冲液配制EDC（50 mg / mL）。

8. 将20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。涡旋混匀，室温下连续混合孵育0.5?4小时。

9. 将试管放入磁力架中，磁分离并吸弃上清。该上清含未结合的配体，如果优化方案可以保存用于分析。

10. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒，磁分离并吸弃上清。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒，磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。

13. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。

部分采用本磁珠文献

1. Qiuyuan Lin, Zhipeng Huang, Xin Ye, Bin Yang, Xueen Fang, Baohong Liu, Hui Chen, Jilie Kong,Lab in a tube: Isolation, extraction, and isothermal amplification detection of exosomal long noncoding RNA of gastric cancer, Talanta, Volume 225, 2021, 122090, （羧基聚合物磁珠Homo-COOH偶联抗体）

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