G-Avidin蛋白磁珠是将来源于蛋清的Avidin蛋白与羧基聚苯乙烯颗粒的共价偶联制备的磁性颗粒。Avidin蛋白是鸡蛋清和鸟类组织中存在的蛋白质。Avidin蛋白是一种富含色氨酸的糖蛋白，对酸或蛋白水解酶的变性具有很强的抵抗力。得到的磁珠是在pH范围为2至11时稳定。它们可用于亲和层析纯化，测定开发和免疫沉淀。另外，通过将Biotin掺入一种扩增聚合物中，Avidin磁性颗粒特别适用于物理分离聚合酶链式反应中产生的两条DNA链。 G-Avidin- Biotin生物分子复合物易于使用磁铁与未结合的生物素 - 生物分子分离，因此提供了一种快速，简洁的方法来标记具有磁性纳米颗粒的生物分子。

PuriMag G-Avidin的特点

直径：200nm

浓度：10mg / ml
配体：抗生物素蛋白（来自鸡蛋清）
类型磁化：超顺磁性
基质：GMA/DVB
表面组密度：1.5 - 2.0μgAvidin/ mg磁珠（每粒子300-400分子Avidin蛋白）

在2-8℃（最多3个月）储存在缓冲液（25mM tris-HCl，0.15M NaCl，0.05％吐温20,0.09％NaN 3，pH 7.2）中。不要冻结试剂。

重要产品信息

生物素化的分子可以用8M盐酸胍，pH 1.5或用SDS-PAGE样品缓冲液煮沸从 G-抗生物素蛋白中洗脱。这些苛刻的洗脱条件可能导致抗生物素蛋白亚基浸入样品中。另外，抗生物素蛋白可能因这些亚基的丧失而丧失相当大的结合能力。

注意：这些洗脱条件可能会不可逆转地损害目标蛋白质。如果需要使用非变性条件洗脱生物素化分子，请使用单体抗生物素蛋白磁珠，其允许温和的洗脱条件以回收生物素化的分子而不会受到抗生物素蛋白亚基的污染，并且不会降低树脂的结合能力。

?本说明书中包含的协议是本产品的应用示例。特定应用和系统需要优化。

免疫沉淀的程序

A.所需的其他材料
?结合缓冲液：磷酸盐缓冲盐水（例如，0.1M磷酸盐，0.15M NaCl; pH 7.2）。为减少可能的非特异性结合，加入0.1％SDS，1％NP-40或0.5％脱氧胆酸钠。
?生物素化抗体：使用约30μg生物素化蛋白/ mg珠。在结合缓冲液中制备浓度为0.2-10mg / mL的0.1-1.2mg生物素化抗体。

?洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸?HCl，pH 2.8

B.程序
注意：所需抗原的量和孵育时间取决于所用的抗体 - 抗原系统，并且必须针对每个特定系统进行优化。为了适当混合，确保总反应体积不能完全填充微量离心管。

1.将Avidin磁珠和试剂平衡至室温。
2.为了形成免疫复合物，将生物素化抗体加入样品或裂解液中，在室温下孵育至少30分钟或在4℃下孵育过夜。
3.轻轻旋转Avidin磁珠瓶，以获得均匀的悬浮液。将适量的珠浆移液到微量离心管中。磁性分离并丢弃上清液。
4.加入结合缓冲液洗涤Avidin磁珠两次，磁力分离2分钟。丢弃上清液。
5.将免疫复合物添加到珠子中并在室温或4℃下混合孵育1小时。
6.用结合缓冲液洗涤抗生物素蛋白结合的复合物并磁力分离2分钟。丢弃上清液。重复此洗涤程序至少四次。
7.样品可以在SDS-PAGE样品缓冲液中煮沸并电泳用于分析。或者，将洗脱缓冲液加入到珠子中以回收抗原。如果使用0.1M甘氨酸?HCl，pH 2.8，则通过加入适当的浓缩缓冲液如1M Tris，pH 7.5（100μL该缓冲液至1mL样品就足够）立即去除液体并立即调节回收级分的pH。

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