狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗体检测试剂盒用于检测猫、犬等动物血清中的狂犬病毒抗体，用于评估狂犬病毒疫苗免疫状况。

本试剂盒采用阻断ELISA法，在酶标板条微孔上预包被狂犬病毒抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有狂犬病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标的抗狂犬病毒单抗，样本中的抗体阻断了单抗与包被板上抗原的结合；经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

组份

需自备的设备及试剂

1.微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。

2.一次性移液器吸头。

3.量筒：500ml。

4.96孔板酶标仪。

5.蒸馏水或去离子水。

6.洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

注意事项

1.试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2.不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3.终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4.TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5.检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6.所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8.抗原包被板为一次性用品，不得重复使用；

操作步骤

1.每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔，阴、阳性对照不用稀释，直接取100ul加入反应孔。

2.将样品稀释液按90ul/孔加入到微孔反应板内，之后将待检样品血清按10ul/孔加入孔内并吹打混匀（移液器枪头请勿混用）；

3.盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。

4.小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，然后在干净吸水纸上拍干。

5.每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

6.小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同4。切记之后在干净吸水纸上拍干。

7.每孔加显色液100μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

8.每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD值0.5，同时阳性对照(P)阻断率50%；

计算方法：

PI (阻断率)= 1 —（样品OD值 ÷ 阴性OD均值）

阴阳性判断：

PI(阻断率)40%则判断为阳性；

PI≤40%则判断为阴性。

注：（PI=40%相当于抗体滴度0.5IU/ml）

有效期

贮存方法：2 - 8oC下贮存。

有效期：12个月。