羧基磁珠(G-COOH)是采用亲水的高分子材料GMA与超顺磁性材料复合形成的一种新型功能化磁性纳米颗粒,提供永久结合和固定各种胺基配体。与传统磁珠相比,G-COOH磁珠具有超顺磁性、更快的磁响应性同时保持微球良好的分散性、极低的非特异性吸附和更高的表面羧基密度等特性,能便捷高效地与多种生物配体(蛋白、多肽、寡聚核苷酸、药物分子等)进行高载量共价偶联,具有非常高的目标物质结合能力,是医学与分子生物学研究中重要的载体工具。用EDC活化磁珠表面的羧基,使配体通过伯胺基与羧基磁珠偶联,可形成稳定的酰胺键。 G-COOH磁性纳米颗粒,适用于各种磁性分离应用,包括亲和力富集、蛋白质纯化、免疫沉淀和细胞分选。
二、产品特性
形态:超顺磁球形
储存:10 mg/mL ,去离子水中2~8 °C保存,勿冻结。
Coupling Buffer(偶联缓冲液):
Coupling Agent(偶联试剂):
Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)
TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.
四、 G-COOH的使用
注意:
■ 为获得最佳性能,在无胺偶联缓冲液中偶联,蛋白应为0.5?4mg / mL,寡核苷酸为20?100μM,不含其它蛋白。较高浓度的蛋白可灵活地优化反应体积。含tris、甘氨酸、醋酸盐或柠檬酸盐的缓冲液不能使用。
p class="MsoNormal" align="left" background-color:#ffffff;"="" style="box-sizing: border-box; margin-top: 0px; margin-bottom: 0px; color: rgb(51, 51, 51); font-family: -apple-system, BlinkMacSystemFont, Segoe UI, Roboto, Helvetica Neue, Arial, Noto Sans, sans-serif, Apple Color Emoji, Segoe UI Emoji, Segoe UI Symbol, Noto Color Emoji; background-color: rgb(255, 255, 255);"■ 含有0.01%的Triton X-100的50 mM MES缓冲液(pH 6.0)可用作活化和偶联缓冲液。当使用化学合成的寡核苷酸时,寡核苷酸末端应有5"-胺基以偶联羧基磁珠。
偶联方案A:使用EDC的两步偶联
1. 确保蛋白或配体在无胺偶联缓冲液中。100μL偶联缓冲液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。
3. 加入200μL偶联缓冲液,涡旋20秒洗涤磁珠,磁分离并吸弃上清。
5. 使用前用偶联缓冲液中配制EDC(50 mg / mL)。
7. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠,涡旋混匀,磁分离并吸弃上清。
8. 向羧基磁珠加入100μL偶联缓冲液和50?400μg蛋白质或配体,涡旋混匀。
10. 将试管放入磁力架中,磁分离并吸弃上清。该上清液含有未结合的配体,如果优化方案可保存用于分析。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。
14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。
该方案与上述方案类似,但使用NHS。可通过加入稳定胺反应性中间体的sulfo-NHS来增加EDC介导的反应的效率。
2. 涡旋振荡重悬 G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中,磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
6. 向磁珠中加入60μL偶联缓冲液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。涡旋混匀。
8. 用200μL偶联缓冲液清洗磁珠。涡旋混匀,磁分离并吸弃上清。
10. 将试管放入磁力架中,磁分离并吸弃上清。该上清液含未结合的配体,如果优化方案可保存用于分析。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。室温孵育30?60分钟。磁分离并吸弃上清。
14. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。
这是一个快速结合方案,在一个反应中同时加入羧基磁珠、EDC和配体。该方案最适合偶联寡核苷酸和小分子,当配体上的羧酸基团的激活不会影响后续实验时。
2. 涡旋振荡重悬 G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中,磁分离并吸弃上清。
4. 按步骤3再清洗羧基磁珠两次。
6. 在室温下孵育30分钟。
8. 将20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。涡旋混匀,室温下连续混合孵育0.5?4小时。
10. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。涡旋20秒,磁分离并吸弃上清。
12. 向羧基磁珠加入500μL淬灭缓冲液。剧烈漩涡20秒,磁分离并吸弃上清。按该步骤再洗两次磁珠。
13. 从磁力架上取下EP管。添加100μL存储缓冲液。涡旋混合并在2?8°C储存偶联好的磁珠。