产品概述：

Biozellen?3D类器官培养基质胶套装

Biozellen?基质胶 特点：

1、100%植物源材料，无任何动物成分；

2、胺基酸序列100%人源化 ；

3、可调控基质胶硬度进行多种细胞培养；

4、3D细胞/类器官培养种类数量范围更广；

5、无人畜共通病原菌或毒素风险；

6、最适用于医疗级生物原料；

7、高活性、高纯度、可融化；

8、2年保存时间；

9、3D培养结束后基质胶可以温和融化，并保留3D细胞/类器官结构完整性；

Biozellen?3D类器官培养基质胶套装

Catalog No.B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10

Specification2ml-kit、4ml-kit、10ml-kit

StorageStore at-20℃.1年保存.

一、产品描述

Biozellen?3D类器官培养基质胶套装包含全套胶体试剂与溶解试剂，可进行3D类器官培养与微环境等相关实验应用； 本试剂盒操作便利且可调控胶体硬度进行多种类器官培养测试；高分子胶体可快速形成水凝胶， 建议操作此培养胶体前详读此使用指南。

（Biozellen?3D类器官培养基质胶材料为植物来源，无动物成分）

二、应用

?3D类器官培养。

? 适合用于3D类器官药物筛检平台

三、适用细胞种类

? 原代细胞

? 干细胞

四、试剂盒组分

		B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10 （对应数量和内容）
货号.	Components	Amount	Content
B-P-00003-A	A基质胶(2X)	4、8、20	0.5mL / tube
B-P-00003-C	C缓冲溶液(10X)	1、2、1	1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT
B-P-00003-D	D缓冲溶液(10X)	1、2、1	1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT

五、使用步骤：

A.试剂制备

A基质胶：将A基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟， 确认完全融解.

C缓冲溶液(1X)制备：使用前将10X C缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清DMEM、opt-MEM)制备成1X C缓冲溶液。(不要用PBS稀释C缓冲液) .

D缓冲溶液(1X)制备:使用前用冷的1x PBS稀释10X D缓冲溶液至1X D缓冲溶液.

B.Biozellen?3D类器官培养基质胶的制备

全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：

1.将24孔培养板放置于冰上预冷。
2.细胞计数后取2×105~2×107细胞与0.5毫升37℃ 培养基均匀混合，并与0.5毫升37℃A胶按照1:1等比例均匀混合，最终细胞密度105~107cells/mL。

注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验，贴壁细胞应在~80%汇合度下培养。

3.取20-40微升步骤2含细胞的混合A胶溶液滴于 步骤1预冷的培养板上，胶体将于5分钟内成胶。 注:测试胶体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。

4.待胶体成胶后，添加1毫升冰的1X C缓冲溶液，并盖过步骤3的胶溶液，固定15分钟。

5.待15分钟固定后，小心的吸取C缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

6将含有细胞的胶于37°C二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作。

C、溶胶与收集细胞球体准备程序

小心的将培养基吸取移除，并用1X PBS进行清洗。

小心的将1X PBS吸取移除，并添加1毫升冰的D缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应5分钟。

温和的用1毫升移液管吸取，直到胶滴完全溶解。

将含有细胞球体的溶液吸入1.5毫升离心管，用1000 rpm的转速离心10分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析。

D、收集单颗细胞准备程序

在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作

1.添加trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于37°C混合反应。

2.用1毫升移液管混合，直到细胞体完全分解。

3.待细胞球体完全分解，加入3倍体积的1X PBS，并用1000转的转速进行离心10分钟，并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。

六、案例分享

A.形成3D肿瘤球体成功案例分享

B.Biozellen基质胶被溶解后分离的完整3D细胞结构照片

培养后的3D细胞球体， 在Biozellen基质胶被试剂盒里面的

D Buffer溶解分离后仍然可以得到完整的3D细胞结构