北京奥秘佳得医药科技有限公司有强大的生物试剂研发团队，可以提供多种生物试剂，满足您科研的需要：

高纯质粒中提试剂盒

一、产品简介。

本产品是一款从工程菌内大量提取质粒 DNA 的试剂盒，并能够去除蛋白质与 RNA，得到高纯度的质粒 DNA，用于转染和酶切等生物学实验。

二、运输与存储条件。

本试剂盒中的 RNase A 需低温运输，-20 ℃保存，其它组份常温运输与保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 有效去除蛋白质与 RNA，得到高纯度的质粒 DNA。

2. DNA 纯化柱可结合 2mg 质粒 DNA。

四、使用说明。

1. 试剂配制：

a) Buffer P1 (重悬液) 配制。将 RNase A 全部加入 Buffer P1 中，混匀，4 ℃保存。

b) Buffer W3（漂洗液）配制。溶液中加入 70 mL 无水乙醇，混匀。

2. 细菌收集。将菌液加入 50 mL 离心管，12,000×g 离心 2 min，弃上清。剩余菌液加入对应的离心管中，再次离心并弃上清，直至所有菌液收集完毕，将离心管倒立在纸巾上，吸尽残余液体，以免影响后续实验。

3. 加入 2.5 mL Buffer P1（确定加入 RNase A），振荡（vortex）至细菌完全重悬。（若细菌沉淀没有完全重悬，会影响裂解效果，降低质粒 DNA 提取量。）

4. 加入 2.5 mL Buffer P2（室温较低时，Buffer P2 易沉淀，请在 37℃水浴锅中加热 10 min，待沉淀消失后再使用），轻柔地上下翻转 20 次，液体变透明，保证细菌充分裂解。

（不要剧烈震荡（vortex），以免 DNA 断裂。裂解时间不宜超过 5 min，以免质粒 DNA 受到破坏。细菌充分裂解后液体变得清亮粘稠。如果仍然浑浊，则细菌过量，裂解不彻底，应加大裂解液用量。）

5. 加入 3.5 mL Buffer P3，立即温和地上下翻转 20 次，充分混匀，出现白色絮状沉淀。（混匀要充分，以免出现局部沉淀，影响中和效果。）

6. 12,000×g 离心 10-20 分钟，上清转入 15 mL 离心管中。（尽量避免吸取白色沉淀）

7. 上清加入 DNA 纯化柱，12,000×g 离心 1 min，弃滤液。剩余的上清液依次加入相应的 DNA 纯化柱，12,000×g 离心 1 min，弃滤液，完成 DNA 吸附。

8. 加入 2 mL Buffer W1（去蛋白液），12,000×g 离心 1 min，弃滤液。

9. 加入 2 mL Buffer W3（漂洗液），12,000×g 离心 1 min，弃滤液。

10. 空的 DNA 纯化柱，12,000×g 离心 2 min，尽量去除 DNA 纯化柱中残余液体。

11. 将 DNA 纯化柱转移至新的 15 mL 离心管中，在柱中央滴加 0.8-1 mL Elusion Buffer D 或 ddH2O，室温静置 5 min。

12. 12,000×g 离心 2 min，收集质粒 DNA 溶液。

13. 测定质粒 DNA 浓度，或置于-20 ℃冰箱中保存。

五、注意事项

1. 质粒提取量与细菌浓度及质粒拷贝数等因素有关，低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒提取时应加大细菌使用量。

2. 使用70 ℃预热的Elution Buffer D或ddH2O洗脱质粒DNA，可以提高洗脱效率。

3. 新转化的感受态细菌可以提高质粒DNA产量。

4. 洗脱体积不应小于0.5 mL，否则降低DNA洗脱效率。

5. 为了您的健康，实验过程中请穿实验服，并佩戴手套与口罩。

注意：

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

北京奥秘佳得医药科技有限公司有强大的生物试剂研发团队，可以提供多种生物试剂，满足您科研的需要：

北京奥秘佳得医药科技有限公司是一家以新药研发为主要方向的公司，目前公司经营范围还涉及生物试剂的研发及销售；化工产品（不含危险化学品及一类易制毒化学品）、实验室设备及辅助设备、实验室耗材等的销售。实验室试剂主要经销的品牌有：麦克林，罗恩，乐研，艾康生物，上海源叶，普西唐以及索莱宝等，客户主要为院校以及科研院所等。经销实验室设备品牌包括：天津艾杰尔，泰斯特，海尔生物医疗，东联哈尔，群安等。耗材主要有耐思NEST、爱思进Axygen等。公司网址：http://www.omiget.com/