产品名称：毕赤酵母感受态制备与转化试剂盒

英文名:Pichia pastoris positive clone assay kit

储存条件： -20 ℃保存，未开封期24个月。

一、毕赤酵母感受态细胞的制备

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在固体YPD培养基平板上划线，30 ℃培养2-4天。

2.选取酵母菌落接种到10 mL液体YPD培养基中，30 ℃摇床过夜培养后将培养物按1%的接种量接种到100 mL液体YPD培养基中三角瓶中培养至OD值为0.6-1.0。

注：每10 mL菌液可用于一次转化。以下操作步骤适用于10 mL菌液。

3.3,000 rpm离心3 min收集菌体沉淀。

4.加入5 mL B1溶液重悬菌体，3,000 rpm离心3 min收集菌体沉淀。

5.再加入200 μL B1溶液重悬菌体，转移到无菌1.5 mL离心管，即为制备好的感受态细胞，可直接用于转化或冻存备用。

6. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 ℃冰箱过夜后，再取出感受态置于-80 ℃冰箱，可保存半年。使用前冰上解冻或直接用于转化。

注：缓慢冷冻良好的转化效率。扩大酵母菌培养体积，相应增加冻存液的使用量，可以一次性制备多只毕赤酵母感受态细胞。

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温馨提示：仅用于科研

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