His-tag标签蛋白纯化磁珠（镍磁珠）/聚甲基丙烯酸酯磁性微球 有库存

西安齐岳生物供应的产品包括：合成磷脂、PEG衍生物,嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯等等，可以满足从毫克级到公斤级的定

用途：分离纯化His标签蛋白

试剂盒储存条件及稳定性：His-tag标签蛋白纯化磁珠（镍磁珠）4~8℃保存即可，在适合的储存条件下该磁珠使用期为1年。

产品简介

BioMag成功研发出的His-tag标签蛋白纯化磁珠（镍磁珠），主要用来小批量纯化和筛选组氨酸标记的蛋白。这类产品的优势在于菌体被破碎后，对菌体碎片进行离心分离就能进行纯化，因此能够大幅缩短纯化过程所需时间，适合于对大量样品的纯化。另外，除了能够纯化可溶性的His-tag融合蛋白质，还能通过添加化学元素胍，纯化出如包涵体融合蛋白质，疏水性融合蛋白质等其它His-tag融合蛋白质。

产品特点

1. 操作简单，可重复使用

2. 可分离出高纯度、产率的蛋白

3. 纯化过程可放大

4. 磁性较强，可被外磁场迅速的捕获

5. 磁珠粒径均一，分散效果好。

磁珠参数

基质：聚甲基丙烯酸酯磁性微球

粒径：30μm

配体：Ni

含量：10%（体积比）

结合力：每毫升磁珠至少可结合5mg组氨酸标记的蛋白

重复使用次数：10次以上

保存：4~8℃，20%乙醇

用途

His-tag标签蛋白纯化磁珠（镍磁珠）主要是用来简化组氨酸标记的蛋白的小批量纯化和筛选。

操作步骤

I. 缓冲液的准备

目标蛋白与His-tag标签蛋白纯化磁珠（镍磁珠）的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，而各种缓冲液配制也将在程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。因此，在较大规模蛋白纯化之前，用户应该自行设计实验，筛选出适合纯化目标蛋白的缓冲液体系，主要包括结合缓冲液，洗涤缓冲液和洗脱缓冲液

以下提供的缓冲液体系适用于多数组氨酸标签蛋白的纯化，以供参考。

（1）结合缓冲液：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，5~50 mM Imidazole，pH7.4

（2）洗涤缓冲液：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，50~100 mM Imidazole，pH7.4

（3）洗脱缓冲液：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl， 500 mM Imidazole，pH7.4

II.样品处理

（1） 大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：按每克细胞加入蛋白酶，重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，在冰上放置30 min，以降解核酸。另外，用户也可以根据实际需要对蛋白样品进行离心操作。

（2） 胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量结合缓冲液稀释，即为粗蛋白样品。

（3） 动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，用适量PBS（自备）洗涤1次，弃上清，用适量含1%（v/v）Triton X-100或1%（v/v）NP-40的结合缓冲液重悬，加入蛋白酶，置于冰上10 min，即为粗蛋白样品。

III. 磁珠预处理

（1） 将His-tag标签蛋白纯化磁珠（镍磁珠）置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取适量的磁珠悬液于离心管中，进行磁性分离，弃上清液，从磁性分离器上取下离心管。

（2） 加入相同体积的结合缓冲液到上述装有磁珠的离心管中，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，进行磁性分离，移去上清液。重复洗涤2次。

IV. 目标蛋白与磁珠结合

以纯化大肠杆菌表达的组氨酸标签蛋白（2g湿重菌体预估目标蛋白产量为10~20 mg）为例说明蛋白纯化操作。

（1） 用10 mL 结合缓冲液悬浮2g湿重的菌体，进行破碎和裂解之后，即为目标粗蛋白样品，加入到装有预处理磁珠的离心管中，将离心管置于漩涡混匀器振荡15s。

（2） 将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合20~30 min（如果需要，可以在2~8℃的低温环境下旋转混合1h，目标蛋白降解）。

（3） 将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离，移出上清液至新的离心管中以备后续检测，从磁性分离器上取下离心管进行后续洗涤步骤。

（4） 加入相同体积的结合缓冲液到上述装有磁珠的离心管中，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，进行磁性分离，移去上清液。重复洗涤2次。

V. 磁珠洗涤

（1） 加入10 mL 洗涤缓冲液到装有磁珠的离心管中，轻轻翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测。重复此述步骤1次。

（2） 加入10 mL 洗涤缓冲液到装有磁珠的离心管，使磁珠重新悬浮，将磁珠悬液转移到新的离心管（避免原离心管壁上非特异性吸附蛋白污染目标蛋白），磁性分离，移出上清液到清洗液收集管。

Ⅵ. 目标蛋白洗脱

（1） 用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度，加入2~10 mL 洗脱缓冲液，轻轻翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品。

（2） 如果需要，可以重复上述步骤1次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否洗脱完全。

（3） 通过SDS-PAGE或Western blotting检测目标蛋白。如果需要测定蛋白质浓度，可以采用洗脱缓冲液洗脱再进行测定，或者采用透析、超滤等方法去除Imidazole后再进行浓度测定。

产品供应：

微球产品名称	表面基团
Eu-时间分辨荧光纳米微球	聚苯乙烯-羧基PS(-COOH)
Eu-时间分辨荧光纳米微球	聚苯乙烯-亲和素PS(-SA)
Sm-时间分辨荧光纳米微球	聚苯乙烯-羧基PS(-COOH)
彩色微球（红色/粉色/橙色/黄色/绿色/蓝色/黑色）	聚苯乙烯-羧基PS(-COOH)
磁性微球	聚苯乙烯-羧基PS(-COOH)
PS纳米微球/空白微球	聚苯乙烯-羧基PS(-COOH)
层析填料产品名称	对应GE产品
NI-CrystaroseC FF/镍亲和层析填料	Chelating FF
CNBr-Activated Crystarose 4B/溴化氢活化琼脂糖凝胶 4B	CNBr-Activated sepharose 4B
CNBr-Activated Crystarose 4FF	CNBr-Activated sepharose 4FF
CNBr-Activated Crystarose 6B	CNBr-Activated sepharose 6B
CNBr-Activated Crystarose 6FF	CNBr-Activated sepharose 6FF
NHS-Activated Crystarose 4FF
ECH Crystarose 4B	ECH sepharose 4B
EAH Crystarose 4B	EAH sepharose 4B
Epoxy-activated Crystarose 4B	Epoxy-activated sepharose 4B
ECH Crystarose 6B	ECH sepharose 6B
EAH Crystarose 6B	EAH sepharose 6B
Epoxy-activated Crystarose 6B	Epoxy-activated sepharose 6B
Crystarose 2B	Sepharose 2B
Crystarose 4B	Sepharose 4B
Crystarose 6B	Sepharose 6B
Crystarose 2FF	Sepharose 2FF
Crystarose 4FF	Sepharose 4FF
Crystarose 6FF	Sepharose 6FF
Crystarose DEAE FF	Sepharose DEAE FF
Crystarose CM FF	Sepharose CM FF
Crystarose Q FF	Sepharose Q FF
Crystarose SP FF	Sepharose SP FF
Crystarose Protein A FF	Sepharose Protein A FF
Crystarose Protein G FF	Sepharose Protein G FF
Crystarose Protein A HP	Sepharose Protein A HP
Crystarose Protein G HP	Sepharose Protein G HP
Crystarose 2HP	Sepharose 2 HP
Crystarose 4HP	Sepharose 4 HP
Crystarose 6HP	Sepharose 6 HP
Crystarose DEAE HP	Sepharose DEAE HP
Crystarose CM HP	Sepharose CM HP
Crystarose Q HP	Sepharose Q HP
Crystarose SP HP	Sepharose SP HP
Crystarose NI FF	Sepharose NI FF
Crystarose NI HP	Sepharose NI HP
Crystarose GST FF	Sepharose GST FF
Crystarose GST HP	Sepharose GST HP

温馨提示：西安齐岳生物供应产品仅用于科研，不能用于人体！

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