标记抗体的原理:
tRNA异亮氨酸连接酶抗体FITC异硫氰酸荧光素是目前较为常用的标记抗体的方法,FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个抗体分子上最多能标记15~20个FITC分子,被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析,从而对抗原进行定性、定位或定量。
别 名 2010002H18Rik; C79125; EC 6.1.1.5; FLJ10326; Iars2; IleRS; isoleucine tRNA ligase 2, mitochondrial; isoleucine tRNA ligase, mitochondrial; isoleucine tRNA synthetase 2, mitochondrial; Isoleucine--tRNA ligase; isoleucine-tRNA synthetase 2; Isoleucine--tRNA ligase, mitochondrial; isoleucyl tRNA synthetase 2, mitochondrial; Isoleucyl-tRNA synthetase; MGC63429; mitochondrial; mitochondrial isoleucine tRNA synthetase; rCG_20084; RGD1311857; SYIM_HUMAN.
英文名称 Anti-IARS2
中文名称 tRNA异亮氨酸连接酶抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Horse
产品类型 一抗
研究领域 染色质和核信号 线粒体 表观遗传学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 109kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human IARS2
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
直接标记法:
抗体的准备:取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量,置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液,冰槽中搅拌5~10min;
荧光素的准备:按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算,准确称取后加入抗体溶液中;
标记:边搅拌边加入荧光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h;
透析:结合完毕后,先将结合物以3000r/min离心20min,除去少量沉淀物后装入透析袋中再置于pH8.0缓冲盐的烧杯中透析过夜;
过柱:取透析过夜的标记物,过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱,分离游离的FITC,收集标记的荧光抗体进行鉴定。
间接标记法:
抗体的准备:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS将待标记的抗体蛋白溶液稀释到浓度为30~40mg/ml,置于三角烧瓶内放入冰槽中;
荧光素的准备:按每毫克蛋白质加入0.01mg的荧光素称取,溶解于等量的3%重碳酸钠水溶液中;将抗体蛋白溶液与FITC溶液等量混合,在0~4℃中搅拌18~24h,充分搅匀;
透析或过柱层析。
改良法:
抗体的准备:取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量,置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液,冰槽中搅拌5~10min;
荧光素的准备:按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算,准确称取后加入抗体溶液中;
标记:边搅拌边加入荧光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h;
用半饱和硫酸铵将标记的抗体蛋白沉淀分离,3000r/min离心30min,倾去上清液中的游离荧光素,再用缓冲盐水透析除去硫酸铵。将制备好的荧光抗体加0.01%NaN3,分装保存。
透析法:
用0.025mol/L PH9.2碳酸盐缓冲液,将待标记的抗体蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中;
用同一缓冲液将FITC制成0.1mg/ml的溶液,置于圆形容器内,并将透析袋浸没其中,4℃搅拌24h;
取出透析袋中标记液。立即过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱,除去游离荧光素,收集荧光抗体进行鉴定。
抗体的结构:
抗体是具有4条多肽链的对称结构,其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链);2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种,重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中,不同抗体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。可变区位于"Y"的两臂末端。在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈,这些氨基酸的残基组成和排列顺序更易发生变异区域称高变区。高变区位于分子表面,最多由17个氨基酸残基构成,少则只有2 ~ 3个。高变区氨基酸序列决定了该抗体结合抗原抗原的特异性。一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的,位于两臂末端称抗原结合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部称结晶片段(crystalline fragment,FC),糖结合在FC 上。
HEPG2.2.15 肝癌细胞HBV病毒株草酰乙酸Oxaloacetic acid质量规格:>97%,BR
CL-0290MDA-MB-468(人癌细胞)5×106cells/瓶×2硫酸锌七水(AR)Zinc sulfate, heptahydrate质量规格:>99.5%,AR
RLF, 大鼠成纤维细胞1酸钾钠四水Potassium tatrate, tetrahydrate质量规格:>98%,BR
双位点HC-kit受体细胞株;DMF7 人子宫内膜上皮细胞完全培养基 100mL缩二脲Biuret质量规格:>98%,BR
人脊髓星形胶质细胞总RNAHA-sp NA硫酸镁无水(分子生物学级)Magnesium sulfate anhydrous质量规格:>99%,分子生物学级
小鼠神经母细胞瘤细胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]右旋酮洛芬氨丁三醇质量规格:>98.5%,BR(S)-Ketoprofen trometamol
BPIFA2 Others Human 人 BPIFA2 / C20orf70 人细胞裂解液 (阳性对照) 右旋酮洛芬氨丁三醇(标准品)质量规格:含量测定(S)-Ketoprofen trometamol
人食管上皮细胞完全培养基 100mL植物凝胶(Sigma)质量规格:进分;SigmaP8169Phytagel
7WML6.0细胞,人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株 生孢梭菌 狗肺成纤维样细胞;DogL1右旋酮洛芬质量规格:>98.5%(S)-(+)-Ketoprofen
PPBP Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 标签)甲氨蝶呤-甲基-d3质量规格:美国进口Methotrexate-methyl-d3
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS3PROTEINASEK,20MG/MLSOLUTION蛋白酶K,20mg/ml溶液生物技术级5MLCOLD
JF-305细胞,人胰腺癌细胞 人皮肤癌细胞系,HS-1细胞 KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株;G422本达 Bqntczonq 2027-89-0
HuH-7(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2Cytidine胞嘧啶核苷7.5KUBR,98%
Promocell C-22011 Endothelial Cell GrowthMedium 2, 内皮细胞生长培养基2型(即用) 500mlKANAMYCIN50MG/ML卡那霉素溶液超级20MLFrozen
人肺动脉成纤维细胞裂解物HPAFL(二甲基价酰按)
tRNA异亮氨酸连接酶抗体大鼠周神经成纤维细胞(RPNF)(5×105) HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系 Human氧化亚铜shēng huà shì jì容量:500克
恒河猴胚肾细胞;FRhK-4 [FRhK4]4,5-二基咪唑 4,5-oimidazole,99.0% 1122-28-7 5G 通用试剂
CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 人细胞裂解液 (阳性对照) L-鸟安醋言醋盐 L(+)-Ornithinq xy7nochloridq 3184-13-
CL-0221SVEC4-10(小鼠结内皮细胞)5×106cells/瓶×2ACRYL/BIS37.5:1;40%SOLUTION酰胺/甲叉 37.5:1, 40%溶液蛋白组学级500MLCOLD
J-111细胞,单核细胞白血病细胞 人EB病毒转化的B细胞,CGM1细胞 人细胞;Hela 229 [HeLa229]102-79-4正丁基二2,2'-(Butylimino)diethanol
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