土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容：

缓冲液：液体8mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体8mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体10mL×1 瓶，4℃避光保存。

产品说明：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

需自备的仪器和用品：

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理

新鲜土样风干，过40 目筛。

二、测定操作表

	对照管	测定管
土样(g)	0.02
甲苯（μL）	10
混匀，25℃静置15min
缓冲液（μL）	120	40
试剂一（μL）		80
混匀，37℃震荡培养1h，8000rpm，4℃，离心10min，取上清100μL
试剂二（μL）	40	40
混匀，沸水浴7min
试剂三（μL）	40	40
试剂四（μL）	100	100
混匀，37℃水浴30min，取200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定585nm处吸光值，记为A 对照管和A 测定管，ΔA=A 测定管-A 对照管。

三、计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

    标准曲线：y=2.3575x-0.0143，R²=0.9989

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（mg/d/g）=（ΔA +0.0143）÷2.3575×V 反总÷W÷T

= 15.264×（ΔA +0.0143）÷W

V 反总：反应体系总体积，0.3mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1/24d

b. 用96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=1.1788x-0.0143，R2=0.9989

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（mg/d /g）=（ΔA +0.0143）÷1.1788×V 反总÷W÷T

= 30.528×（ΔA +0.0143）÷W

V 反总：反应体系总体积，0.3mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1/24d

注意事项：

1． 试剂一充分混匀后再使用。

2． 反应结束后立即进行比色。

3． 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。