土壤酸性蛋白酶（Solid -Acid Protease，S-ACPT）试剂盒说明书

微量法

产品内容：

试剂一：液体30mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水充分溶解待用；

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入50uL 试剂七使粉剂润湿，然后加入10mL 试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入20mL 蒸馏水充分溶解待用；

试剂五：液体3mL×1 瓶，4℃保存；

试剂六：液体1.5mL×1 支，0.05mg/mL 标准酪氨酸溶液，4℃保存；

试剂七：液体1.5mL×1 支，4℃保存；

产品说明：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

酸性条件下，S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm 有特征吸收峰。

所需仪器及设备：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水。

操作步骤：

一、测定操作：

1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、 试剂二、三和四40℃水浴10min。

3、 样本测定：

试剂名称		测定管		对照管
风干土样（g）		0.01		0.01
试剂一（μL）		50		150
试剂三（μL）		100
混匀，40℃水浴30min，振荡5-6 次，使土样与反应液充分接触
试剂二（μL）		50		50
混匀，8000rpm 25℃离心10min，取上清液，在EP管或96孔板中加入下列试剂
	测定管		对照管		标准管
上清液（μL）	30		30
试剂六（μL）					30
试剂四（μL）	140		140		140
试剂五（μL）	30		30		30

混匀，40℃水浴20min，680nm 下读取各管吸光值A

注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

二、S-ACPT 活性计算：

单位定义：每天每g 土样中产生1mg 酪氨酸为一个S-ACPT 活力单位。

S-ACPT(U/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管

C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.2mL；T：反应时间，30min=1/48d； W：样本质量，0.01g。