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土壤蔗糖酶(S-SC)测试盒 试剂盒

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上海优选生物科技有限公司
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土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)试剂盒说明书

微量法

产品内容

试剂一:甲苯1mL×1 瓶,4保存;(自备)

试剂二:液体7.5mL×1 瓶,4保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,4保存;临用前每瓶加入22mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂4保存;

试剂四:液体22mL×1 瓶,4保存。

产品说明

S-SC 能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收,其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、

磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度密切关,是评价土壤肥力的重要指标。

S-SC 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm 有特征光吸收,在一定范围内510nm 光吸收增加速率与S-SC 活性成正比。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、

研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

操作步骤

一、加样表

试剂名称

测定管

对照管

风干土样(g

0.03

0.03

试剂一(μL

5

5

振荡混匀,使土样全部湿润,37水浴15min

试剂二(μL

75

75

试剂三(μL

220


蒸馏水(μL


220

充分混匀,放入37水浴培养24 小时,10000 g4,离心5min,取上清液

上清液(μL

85

85

试剂四(μL

215

215

充分混匀,95水浴5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,蒸馏水稀释10倍(可以吸取100μL,加入900μL 蒸馏水稀释;若吸光度大于4,可以加大稀释倍数),取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中510nm 处读吸光值A。计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

二、S-SC 活性计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 4.9x -0.062x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 还原糖定义为一个S-SC 活力单位。

S-SC 活力(U /g 土样)=(A+0.062) ÷4.9×10×V 反总÷W÷T =20.4×(A+0.062)

10:稀释倍数;T:反应时间,1d V 反总:反应体系总体积:0.3mLW:样本质量,0.03g

b. 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 2.45x -0.062x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

单位的定义:每天每g 土样中产生1mg 还原糖定义为一个S-SC 活力单位。

S-SC 活力(U /g 土样)=(A+0.062) ÷2.45×10×V 反总÷W÷T =40.8×(A+0.062)

10:稀释倍数;T:反应时间,1d V 反总:反应体系总体积:0.3mLW:样品质量,0.03g

 

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