血清铁浓度检测试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。

测定原理：

亚硫酸钠还原血清Fe³⁺生成成Fe²⁺，Fe²⁺进一步与2, 2’- 联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。

自备仪器和用品：

离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。 临用前配制，加入15mL蒸馏水充分溶解。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。 临用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15mL蒸馏水充分溶解。

标准液：液体×1 支（EP管），100μmol/L Fe³⁺标准液，4℃保存。

测定：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到520nm，蒸馏水调零。

2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。

3. 空白管：取EP管，依次加入125μL蒸馏水，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm 测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取EP管，依次加入125μL标准液，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取EP管，依次加入125μL血清，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

血清铁浓度计算公式：

血清铁含量(μmol/dL)=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总=10× (A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)

C 标准液：100 μmol/L Fe 3+ 标准液；V 总：1 dL=0.1 L。

注意事项：

1、血清铁含量少，所用器皿（EP 管）需要注意，避免被铁污染。

2、试剂一和试剂二溶液不稳定，需现配现用，新配制的试剂只能当天使用。

3. 最低检出限为1μmol/L。