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β-木糖苷酶（β-xylosidase）测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作表
对照管 |
测定管 |
|
酶液（μL） |
200 |
200 |
试剂一（μL） |
50 |
|
试剂二（μL） |
400 |
350 |
混匀，45℃水浴 20min |
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试剂三（μL） |
400 |
400 |
混匀，静置 5min，1mL 玻璃比色皿，对照管调零，测定A405 。 |
||
β-木糖苷酶活性计算公式
标准曲线：y=3.34x-0.001，R2=0.9991
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质1min 内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/mg prot）=(A405+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000= 542.4×(A 405 +0.001)÷ Cpr
2、按样本重量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g）=(A405+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 542.4×(A 405 +0.001)÷W
3、按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 104个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(A405+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）÷T×1000= 542.4×(A405 +0.001) ÷ 细胞数量（万个）
4、按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(A405+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷V 样÷T×1000= 542.4×(A405 +0.001)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样品体积，0.2mL；138：对硝基苯酚分子量；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1mmol/L=1000μmol/L
注意事项
1、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参
与计算的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定，可选用BCA法测定蛋白含量试剂盒进行测定。
