中性木聚糖酶（Neutral Xylanase，NEX）测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应

用于酿造和饲料工业中，NEX 一般分离自最适生长pH为6-8的微生物。

测定原理：

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还

原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 NEX 活力。

自备实验用品及仪器：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

缓冲液：液体 65mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

粗酶提取：

1. 发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。

2. 酶干粉：称约 0.1mg，加缓冲液 1mL，震荡溶解待测。

测定操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm。

2、操作表

	对照管	测定管
样品（μL）	60	60
缓冲液（μL）	90	90
试剂一（μL）		60
试剂二（μL）	90
混匀，盖紧瓶盖，50℃水浴，反应 30min，立即沸水浴 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开， 以免进水，改变了反应体系)
试剂一（μL）	60
试剂二（μL）		90
混匀，沸水浴显色 5min，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，对照管调零，测定 A 540 。

 

 

NEX 计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=1.6904x+0.0058，R²=0.9989

1. 发酵液NEX活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力（nmol/min/mL）=（A₅₄₀-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000

= 657×(A₅₄₀-0.0058 )

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力（nmol/min/mg）=（A₅₄₀-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000÷W

= 657×(A₅₄₀-0.0058 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5；1000：

转化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：样本质量，mg

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.8452x+0.0058，R²=0.9989

1. 发酵液 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力（nmol/min/mL）=（A₅₄₀-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000

= 1314×(A₅₄₀-0.0058 )

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义：50℃，pH6.0条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力（nmol/min/mg）=（A₅₄₀-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000÷W

= 1314×(A₅₄₀-0.0058 ) ÷W

150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300μL÷60μL=5；1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：样本质量，mg

注意事项：

1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒2-8℃保存，保质期3个月，建议尽快使用。