蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书

可见分光光度法

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体10mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；

产品说明：

蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。SS（EC 2.4.1.13）催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。

SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

操作步骤：

一、测定样品提取：   

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。   

二、测定操作表：

按下表操作：

试剂名称（μL）	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	30	30
蒸馏水		150	150	180
试剂一	150
试剂二			30
混匀，25℃准确水浴10min
试剂三	50	50	50	50
沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却
试剂四	700	700	700	700
试剂五	200	200	200	200

混匀，沸水浴30min，冷却后，在480nm下测定各管吸光值。标准管和测定管只要做一管。每个测定管需要设定一个对照管。

三、SS活力单位的计算：

1、 按照蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性(μg/min/mg prot)=｛C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)｝÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr

2、 按照样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性(μg/min /g鲜重)=｛C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)｝÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷W

C标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间：10min。