果糖(fructose ,FT)含量试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
果糖是一种最为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品
生产中。
测定原理:
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:1mg/mL 标准液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 25ml×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 6ml×1 瓶, 4℃保存;
试剂四:粉剂 0.5g×1 瓶,常温保存。
果糖提取:
称取0.1~0.2g样本,常温研碎;加入0.5mL提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于80℃水浴锅中10min(盖紧,以防止水分散失),振荡3~5 次,冷却后,4000g,25℃离心 10min,取上清;加入少量(约2mg)试剂四,80℃脱色30min(盖紧,以防止水分散失);再加入0.5mL 提取液,4000g,25℃离心10min,取上清液测定。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
样本 |
30 |
||
试剂一 |
30 |
||
蒸馏水 |
30 |
||
试剂二 |
210 |
210 |
210 |
试剂三 |
60 |
60 |
60 |
混匀,95℃水浴反应30min(盖紧,以防止水分散失),冷却后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。
空白管和标准管只要做一管。
果糖含量计算:
1、 果糖含量(mg/mg prot)=(C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)
= (A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、 果糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)
= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷W。
C 标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:最低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot