肝酯酶（ hepatic lipase，HL）活性检测试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

货号：YX-C-B407

规格：50T/24S

 

 

可见分光光度法

 

产品说明：

肝脂酶是脂肪分解酶，在肝实质细胞中合成，存在于肝脏窦周间隙内皮细胞表面和窦周间隙腔面的肝细胞微绒毛表面，可促进脂蛋白中的胆固醇向类固醇激素转化，血浆中的 HL 活性增高时， 血浆中小颗粒可导致 LDL 水平升高，加速动脉粥样硬化的发生。

自备仪器和用品：

天平、研钵、冷冻离心机、水浴锅、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿。

操作步骤：

一、测定操作：

 

	对照管	测定管
样品（μL）	100	100
试剂一（μL）	450	400
试剂二（μL）		50
混匀，30℃水浴 10min
试剂三（μL）	400	400
试剂四（μL）	50	50
充分混匀，30℃静置 5min，于 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 595nm 处吸 光值，记为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管- A 对照管

二、计算公式：

（1） 按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解产生 α-乙酸萘脂产生 1μmol α-萘脂为一个酶活力单位。

HL 活性（μmol/min/mg prot）= （△A+0.1214）÷0.1519×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T

= 6.58×（△A+0.1214）÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解产生 α-乙酸萘脂产生 1μmol α-萘脂为一个酶活力单位。

HL 活性（μmol/min/g）=（△A+0.1214）÷0.1519×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T

= 6.58×（△A+0.1214）÷W

（3） 按照细胞数量计算

酶活性定义：每 104 个细胞每分钟水解产生 α-乙酸萘脂产生 1μmol α-萘脂为一个酶活力单位。

HL 活性（μmol/min/104cell）=（△A+0.1214）÷0.1519×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）

÷T

 

（4） 按照液体体积计算

= 6.58×（△A+0.1214）÷细胞数量

酶活性定义：每毫升血清每分钟水解产生 α-乙酸萘脂产生 1μmol α-萘脂为一个酶活力单位。

HL 活性（μmol/min/mL）=（△A+0.1214）÷0.1519×V 反总÷V 样÷T

= 6.58×（△A+0.1214）

V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min。