脂肪酶（Lipase ，LPS ）活性试剂盒说明书

可见分光光度法

测定意义：

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

测定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。

自备 仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、 甲

苯、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，室温保存。

试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

标准品×1 瓶，10μmol/mL的标准溶液，室温保存。临用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心40min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后16000rpm，4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。

3. 血清: 直接检测。

LPS 测定操作：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到710nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3. 空白管：取5mL离心管，依次加入650μL试剂一250μL试剂二和100μL蒸馏水，置于37℃震荡反应10 min；加入1.2mL甲苯，反复震荡混匀10min，25℃，4000rpm离心10 min；

小心吸取上层溶液1mL，加入1.5mL 离心管中，再加入250μL试剂三，反复震荡5min；25℃，4000rpm 离心10 min，小心吸取上层溶液750μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。记为A空白管。

4. 测定管 ：取5mL离心管，依次加入650μL试剂一250μL试剂二和100μL上清液，置于37℃震荡反应10 min；加入1.2mL甲苯，反复震荡混匀10min，25℃，4000rpm离心10min；小心吸取上层溶液1mL，加入1.5mL 离心管中，再加入250μL试剂三，反复震荡5min；25℃，4000rpm 离心10 min，小心吸取上层溶液750μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。记为A测定管。

5. 标准管：取标准品1mL，加入1.5mL离心管中，再加入250μL试剂三，反复震荡5min；25℃，4000rpm 离心10 min，小心吸取上层溶液750μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。记为A标准管。

LPS  活性计算：

1. 组织 LPS 活性

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mg prot) =[C 标准品×(A测定管-A空白管)÷A标准管]×V反总÷（Cpr×V样）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/g) =[C标准品×(A测定管-A空白管)÷A标准管]×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷W

2. 细胞 LPS 活性

活性单位定义：37℃中每10⁴个细胞每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/10⁴cell) =[C标准品×(A测定管-A空白管)÷A标准管]×V反总÷（细胞数量×V样÷V 样总）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷细胞数量

3. 血清 LPS 活性

活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mL) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷V 样÷T

=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]

C 标准品：10 μmol/mL；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。

注意事项：

1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。