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游离脂肪酸(FFA)含量测定试剂盒说明书

微量法

测定意义：

FFA 既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。血清中 FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、

内分泌功能有关。

测定原理：

FFA 与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于氯仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。

自备仪器和用品：

研钵、冰、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、一个 25 mL 玻璃瓶、两个 10 mL 玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿（三氯甲烷）、无水乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，室温保存。

试剂二：自备。实验前1 d，加入9.6 mL正庚烷，0.4 mL无水甲醇，10 mL氯仿（自备），盖紧后混匀，室温保存。

试剂三：液体×1 瓶，室温保存。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前在试剂瓶中加入4 mL无水乙醇，充分溶解。

标准品：粉剂×1 瓶，室温保存。临用前加入7.8 mL 氯仿充分溶解，即为500μmol/L 的棕榈酸标准溶液。

样品中 FFA提取：

1、血液中 FFA 测定：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3 500 rpm 离心 15min，

取上层血清置于-20℃冰箱保存，待测。

2、组织中 FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000rpm，4℃离心 10min，取上清液，待测。

3、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体（mL）为500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一）冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 秒，间隔 3秒，总时间 3min）；然后 8000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定：

1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取0.5mL EP管，加入 2μL 蒸馏水，100μL 试剂二，40μL 试剂三，

盖紧后充分震荡混匀（2min），静置5 min，取上层清液50μL于0.5mLEP管，加入100μL 试剂二，40μL 试剂四，混匀后倒入微量石英比色皿/96 孔板，静置 15min，于 550nm 光吸收，记为 A 空白管。

3. 标准管：取 0.5mL EP管，加入 2μL 标准液，100μL 试剂二，40μL 试剂三，

盖紧后充分震荡混匀（2min），静置5 min，取上层清液50μL于0.5mLEP管，加入100μL 试剂二，40μL 试剂四，混匀后倒入微量石英比色皿/96 孔板，静置 15min，于 550nm 光吸收，记为 A 标准管。

4. 测定管：取 0.5mL EP 管，加入2μL上清液，100μL 试剂二，40μL 试剂三，

盖紧后充分震荡混匀（2min），静置5 min，取上层清液50μL于0.5mLEP管，加入100μL 试剂二，40μL 试剂四，混匀后倒入微量石英比色皿/96 孔板，静置 15min，于 550nm 光吸收，记为 A 测定管。

FFA 含量计算：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 血液中 FFA 含量计算

FFA（μ mol/L）=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×1 L

=500×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)

C 标准液：500μmol/L；1 L：指每升样品。

2. 组织中 FFA 含量计算

（1）按样本蛋白浓度计算

FFA（μ mol/mg prot）=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A 标准管-A 空白管)] ÷Cpr

=0.5×(A测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr

（2）按样本质量计算

FFA（μ mol/g mass）=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V样总÷W

=0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W

3. 按细胞数量计算

FFA（μ mol/10⁴cell）=[C标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 样总÷细胞数量=0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷细胞数量

C 标准液：500μmol/L；1 L：指每升样品；V 样总：上清液总体积，1 mL=0.001L；Cpr：样

本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下