乳酸含量（lactic acid ，LA ）试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

测定原理

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD⁺还原生成NADH和H⁺，H⁺传递给PMS生成的PMSH₂还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液：液体 55mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 8mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加入1.2mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加12mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1 支，4℃避光保存。

标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。

显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1：

0.3：3：15（mg）的比例充分混匀。

样本处理

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取上清测定。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于 4℃，12000g 离心10min，取上清测定。

3. 血清：直接测定。

测定操作

	空白管	样品对照管	样品测定管	标准对照管	标准测定管
样品（μL）		50	50
标准品（μL）				50	50
H2O（μL）	500	300	450	300	450
试剂一（μL）		150		150
试剂二（μL）	200	200	200	200	200
显色液（μL）	300	300	300	300	300
充分混匀，于 37℃反应 30min，于 1mL 玻璃比色皿，空白管调零，测定 530nm 处吸光值， 分别记为 A1，A2，A3，A4，△A 样=A2-A1；△A 标= A4-A3

注意：空白管、标准对照管和标准测定管只需测定一次

计算公式

1. 按照蛋白含量计算

LA 含量（μmol/mg prot）=△A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr

=2×△A 样÷△A 标÷ Cpr

2. 按照样本质量计算

LA 含量（μmol/g）=△A 样÷△A 标×C 标÷ W

=2×△A 样÷△A 标÷ W

3. 按照细胞数量计算

LA 含量（μmol/10⁴cell）=△A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量

=2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量

4. 按照液体体积计算

LA 含量（μmol/mL）=△A 样÷△A 标×C 标

=2×△A 样÷△A 标

C 标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL

注意事项

1. 空白管、标准对照管、标准测定管只需做一次。

2. 若吸光值超过 1.2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3. 最低检出限为 1.8μmol/L。数，500 万。