谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理：

利用专用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在570nm下进行测定。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 10mL 蒸馏水，充分混匀溶解，用不完的试剂仍 4℃保存。

谷氨酸提取：

1、细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g 组

织，加入2mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议取0.2mL血清（浆）或者细胞培养液加入2mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g常温离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

2、在有盖 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称（μL）	测定管	对照管
样本	1000
试剂一		1000
试剂二	200	200

混匀，90℃水浴 20min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却，于 570nm波长处比色，△A=A

测定管-A 对照管。对照管只要做一管。

注意事项：

为提高检测灵敏度，测定管的吸光值应小于1，若大于1则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。

谷氨酸含量计算：

1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0328x- 2.423； x为谷氨酸含量（μg/mL），y 为吸光值。

2、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算

谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2）=304.9×(△A+2.423)

3、按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr

4、按照样本质量计算

谷氨酸含量(μg/g鲜重)=[(△A+2.423)÷0.0328×V1]÷(W×V1÷V2)=61×(△A+2.423)÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量(μg/10⁴cell)=[(△A+2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423)

V1：加入反应体系中样本体积，1mL；V2：加入提取液体积，2 mL；V3：加入血清（浆）或细胞培养液体积，0.2 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：细菌或细胞总数，1000 万。

注意： 该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定，检测下限为 70μg/mL。