丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品内容：

提取液：液体30mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体50 mL×1 瓶，4℃保存；

产品说明：

GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT 活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清GPT 活性显著增高。因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm 读取吸光值并计算酶活力。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品测定的准备

细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作表

分光光度计预热30min 以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

在EP 管中加入下列试剂

 

 

试剂名称（μL）	测定管	对照管
待测样本	20
试剂一	100	100
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热30min
试剂二	100	100
待测样本		20
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴20min
试剂三	1000	1000

混匀，室温放置10min，在505nm 波长处，测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。

三、计算

以相对吸光值（A 测定管-A 对照管）为横坐标，相应酶活力单位（U/L）为纵坐标。作标准曲线为：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482

血清中GPT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 为A 测定管-A 对照管。

微生物、细胞或组织中GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待测匀浆蛋白浓度（g/L）。χ 为A 测定管-A 对照管。