尿素氮（BUN）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物，在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。

测定原理

在碱性条件下，尿酶水解尿素产生氨，氨与次氯酸反应生成氯胺，再与酚衍生物作用生成绿色吲哚酚，在 630nm 处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加 4mL 蒸馏水充分溶解。

试剂二：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理

1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，匀浆后于25℃，10000g 离心10min，取上清待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后 4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清或其它液体：直接检测。

测定操作

	空白管	标准管	测定管
样品（μL）			20
标准品（μL）		20
H 2 O（μL）	20
试剂一（μL）	40	40	40
充分混匀，于 37℃反应 10min
试剂二（mL）	70	70	70
试剂三（mL）	70	70	70
充分混匀，于37℃显色10min，于微量石英比色皿/96孔板，双蒸水调零，测定630nm处吸光值，记为A空白管、A标准管和A测定管

注意：空白管和标准管只需测定一次。

 

计算公式

1. 按样本质量计算

尿素氮含量（mg/g）=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C 标准品÷W

= 0.005×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)÷W

2. 按细胞数量计算

尿素氮含量（mg/10⁴cell）=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C标准品÷细胞数量= 0.005×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)÷细胞数量

3. 按液体体积计算

尿素氮含量（mg/L）=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C 标准品

=5×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)

C 标准品：标准品浓度，5mg/L；W：样品质量，g

注意事项

1. 配制好的试剂一在2-8℃条件下可保存一周。

2. 最低检出限为80μg/L。