土壤铵态氮试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

土壤中的铵态氮可被土壤胶体吸附，呈交换性铵状态氮肥，也可溶解在土壤溶液中，能直接被植物吸收利用，属于速效性氮素。

测定原理

土壤中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，在 625nm处有特征吸收峰，吸光值与铵态氮含量成正比。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。

试剂组成和配制

提取液：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加4mL双蒸水溶解，现配现用。

试剂二：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃保存。

样本处理

按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g新鲜土样，加入1mL 提取液），振荡提取1h，10000g ，25℃离心10min，取上清液待测。

测定操作表

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至625nm，蒸馏水调零。

2、操作表

	空白管	测定管
样本（μL）		20
提取液（μL）	20
试剂一（μL）	80	80
试剂二（μL）	80	80
充分混匀，25℃静置 1h
试剂三（μL）	20	20
充分混匀，于微量石英比色皿/96孔板中，蒸馏水调零，测定625nm处吸光值A，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y =0.3672x-0.0377，R²=0.9993

NH₄⁺—N 含量（mg/kg）=（△A+0.0377）÷ 0.3672×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

= 27.23×（△A+0.0377）÷W

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提

取液体积，1mL，W：样本质量，g

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.1836x-0.0377，R²=0.9993

NH₄⁺—N 含量（mg/kg）=（△A+0.0377）÷ 0.1836×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

= 54.46×（△A+0.0377）÷W

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提

取液体积，1mL，W：样本质量，g

注意事项

1. 试剂一必须避光低温保存，配制好的试剂一 4℃保存不能超过20天。

2. 浸提液最好在当日完成测定，如果不能完成，可冷冻保存，但不能超过两天。