植物硝态氮试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且

对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

测定原理

在浓酸条件下，NO^3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量 。

自备实验用品及仪器

蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

试剂一：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加1mL浓硫酸充分溶解。

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 支，4℃保存。

样本处理

按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min，待冷却后于25℃，12000g 离心15min，取上清待测。（深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取）

测定操作表

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。

2、操作表

	空白管	测定管
样本（μL）		4
蒸馏水（μL）	4
试剂一（μL）	8	8
充分混匀，25℃静置 30min
试剂二（μL）	190	190
混匀，25℃静置5min，于微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值 A， △A=A测定管-A空白管

注意：空白管只需测定一次。

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.633x-0.0397，R²=0.9997

NO₃^-—N含量（μg/g）=（△A+0.0397）÷ 0.633×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

=79.78×（△A+0.0397）÷W

V 反总：反应总体积，0.202mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.004mL；V 样总：加

入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.3165x-0.0397，R²=0.9997

NO₃^-—N（μg/g）=（△A+0.0397）÷ 0.3165×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

=159.6×（△A+0.0397）÷W

V 反总：反应总体积，0.202mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.004mL；V 样总：加

入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

注意事项

1. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。

2. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。

3. 最低检出限为 62.8μg/g。