苯丙氨酸解氨酶试剂盒说明书

紫外分光光度法

产品简介：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

试验中所需的仪器和试剂：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存，临用前每瓶加入4mL双蒸水充分溶解待用；现配现用。

试剂三：液体2.5mL×1瓶，4℃保存；

操作步骤：

一、粗酶液提取：   

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定操作表：

试剂名称	测定管（μL）	对照管（μL）
样本	20
试剂一	780	800
试剂二	200	200
混匀，30℃准确水浴30min
试剂三	40	40

混匀，静置10min后，用对照管调零，290nm处记录测定管吸光值A  (A=A测定管-A对照管)。

PAL活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

PAL（U/mg prot）=A×反应总体积（1040μL）÷样本体积（20μL）÷反应时间(30min)÷0.1 ÷蛋白浓度（mg/mL）=17.3×A ÷蛋白浓度（mg/mL）

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织在每ml反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

PAL（U/g 鲜重）=A×反应总体积（1040μL）÷﹝样本鲜重（g）×样本体积（20μL）÷V样总（1mL）﹞÷反应时间(30min)÷0.1 =17.3×A ÷样本鲜重（g）