植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 

产品内容： 

提取液：60%乙醇，自备。 

试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。 

试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。 

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。 

产品说明： 

类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。 

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在502nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。 

自备实验用品及仪器

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。 

操作步骤：

一、类黄酮提取 

将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，60℃，提取30min。10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。 

二、测定操作表

	对照管	测定管
样本待测液（μL）	200	200
试剂一（μL）	50	50
混匀，25℃静置5min
试剂二（μL）		50
混匀，25℃静置5min
试剂三（μL）	400	400
60%乙醇（μL）	350	300
混匀，25℃静置15 min，对照管调零，1mL玻璃比色皿，测定A502。

 

 

 

三、 类黄酮含量计算公式 

标准曲线：y = 6.2096x+0.0008，R² = 0.9996

类黄酮含量（mg/g）=（A502-0.0008）÷6.2096×V反总÷(V样÷V样总×W)= 2.013×A502÷W

V样总：加入提取液体积，2.5mL； V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；W：样品质量，g

注意事项： 

1、 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。 

2、 显色完成后立即测定，2小时后吸光值会下降。 

3、 最低检出限为12.8μg/g。 

 

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