葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H₂O₂ ，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理

GOD催化产生H₂O₂，过氧化物酶在有氧存在时催化H₂O₂分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体40mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体8mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体2mL×1 支，4℃保存；

样品测定的准备

组织处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）：直接检测。

测定步骤

1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2、GOD检测工作液的配制：用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混匀，待用；用不完的试剂 4℃可保存一周；

3、测定前将 GOD 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。

4、在1mL玻璃比色皿中加入 40μL 样本和 960μL 工作液，立即混匀并计时，记录 500nm下20s吸光值A1和1min20s 后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。

GOD 活力单位的计算

1、血清（浆）GOD 活力的计算

单位定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=3333×ΔA

2、动物组织 GOD 活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位定义：每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T

=3333×ΔA÷Cpr

 

 

 

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/ g鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V样÷V样总）÷T

=3333×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.04 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。