产品特点：

产品仅用于科研是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

 

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因元件E9’终止子染料法qPCR试剂盒50次	Dye based qPCR kit for transgenic   element E9 'Terminator	FSP10716

 

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

IV型胶原酶(含10mL酶解缓冲液) 1mL4,4'-二氟二苯甲酮(>99.0%(GC))4,4'-Difluorobenzophenone质量规格：>99.0%(GC)

Eca-109-GFP-puro(pLVT7慢病毒构建稳定株)人食管癌细胞 Eca-109-GFP-puro (pLVT7 leiviral consuct stable sain) in human esophageal cancer cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin1,4-二苄氧基苯(>98.0%(GC))1,4-Dibenzoylbenzene质量规格：>98.0%(GC)

IL5 Protein Mouse 重组小鼠 IL5 蛋白 (His 标签)3,3',4,4'-二苯基砜四羧酸二1(>97.0%(HPLC)(T))3,3',4,4'-Diphenylsulfonetetracarboxylic Dianhydride质量规格：>97.0%(HPLC)(T)

人内壳细胞(HHirSC)( 5×105 ) mEPC, 小鼠内皮祖细胞-骨髓 Mouse二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二钠(>98.0%(HPLC)(T))Di Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

恒河猴胚肾细胞;FRhK-4 [FRhK4]双酚 C(>98.0%(GC))2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane质量规格：>98.0%(GC)

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L]小鼠成纤维细胞 NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L] mouse fibroblast cells MEM(NaHCO3 1.5g/L,  Pyruvate 0.11g/L)+10%FBSDL-鸟氨酸盐酸盐(>98%，BC)质量规格：>98%，BCDL-Ornithine, monohydrochloride

IL1B Protein Human 重组人 IL-1 beta / IL1B 蛋白DL-1酸(>99%,BP)质量规格：>99%,BPDL-Tartaric acid hydrate

PC-12(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 RSC96(大鼠雪旺细胞)D-苹果酸(>98%，BR)质量规格：>98%，BRD-Malic acid

CL-0261BC-022(人癌细胞)5×106cells/瓶×2dGTP;三1酸脱氧鸟苷钠盐质量规格：>98%,BR2'-Deoxyguanosine 5'-triphosphate tri salt

IFNB1 Others Mouse 小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 人细胞裂解液 (阳性对照) dCTP;三1酸脱氧胞苷钠盐质量规格：>98%,BR2'-Deoxycytidine 5'-triphosphate di salt

HGC-27(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠骨髓间充质干细胞(EGFP标记) 人脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C假茴香油素，英文名或英文缩写：Pseudocumol，级别：AR，99%，规格：1克

EB病毒转化的人B细胞;KMY10023-异酸酯基基三... 3-Isocyanatopropyltrimethoxysilane 15396-00-6 25G 通用试剂

FST Others Human 人 FST / Follistatin ( FS288 ) 人细胞裂解液 (阳性对照)

转基因元件E9’终止子染料法qPCR试剂盒50次MLF, 小鼠成纤维细胞外消旋N-去甲基异丙嗪质量规格：美国进口rac N-Demethyl Promethazine

人类成纤维细胞系;CNLMG-B5538SKIN 人肝星形细胞完全培养基 100mL异丙嗪亚砜质量规格：美国进口Promethazine Sulfoxide

人视网膜色素上皮细胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg4-羟基雷美替胺质量规格：美国进口4-Hydroxy Ramelteon

IL2RG Others Human 人 IL2RG / CD132 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 雷美替胺代谢产物M-II (羟基位点R型和S型混合物）质量规格：美国进口Ramelteon Metabolite M-II (mixture of R and S at the hydroxy position)

大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞;BOS-5(S)-酰基萘普生-β-D-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口(S)-Naproxen Acyl-β-D-glucuronide

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。