特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增与其他植物没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

产品名称：转基因元件CaMV35S启动子探针法qPCR试剂盒50次

英文名称：A qPCR kit based on promoter probe of camv35s

产品规格：50次

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

 

PCR实验步骤：

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

使用方法:

一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

8. 如果有N个样品，必须设置N 2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。

9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。

以下是公司正在热销的产品：

恒河猴肾细胞;MMK2Boc-D-谷氨酰胺Boc-D-Glutamine 质量规格：≥98%,BR

CDH5 Others Rat 大鼠 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 人细胞裂解液 (阳性对照) 赤霉素A4+7Gibberllin A4+7质量规格：>90%,BR

胰岛β细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3,4-苯并芘(升华精制品)(>95.0%(GC))3,4-Benzopyrene (purified by sublimation)质量规格：>95.0%(GC)

CHMAS细胞，人肥大细胞白血病细胞 小鼠结肠癌细胞,CT26.WT[CT26WT]细胞 支气管上皮细胞生长添加物BEpiCGS双(苯乙酰)二硫化物(>98.0%(HPLC))Bis(phenylacetyl) Disulfide质量规格：>98.0%(HPLC)

NCI-H2170(人肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2苯并红紫4B[pH指示剂]Benzopurpurine 4B质量规格：pH指示剂

NGFR Others Human 人 NGFR/ P75 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-二氨基二苯硫(标准品)质量规格：分析标准品4,4'-Thiodianiline

I型胶原酶(含10mL酶解缓冲液) 1mL丙位十二内酯(分析标准品,≥98.5%(GC))质量规格：分析标准品,≥98.5%(GC) γ-Dodecalactone

CAL 27-EGFP(CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)人舌鳞癌细胞 CAL 27-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) of human tongue squamous cell carcinoma DMEM+10% FBS苯并［g,h,i］芘(标准品)质量规格：分析标准品Benzo[ghi]perylene

IL21 Protein Mouse 重组小鼠 IL21 / Ierleukin 21 蛋白1-十八1(标准品)质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)1-Octadecene

人表皮色素细胞-深色素(HEM)( 5×105 ) MN-h, 小鼠海马神经元 Mouse辛胺(标准品)质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)n-Octylamine

人胰腺腺泡上皮癌;HPAC 大鼠冠状动脉平滑肌细胞完全培养基 100mLDINP邻本二羧酸-二-C8-10支链烷基酯25克AR，98%

B16 小鼠色素瘤细胞醋铯 CqsiuM chroMctq 2630-90-

SEMA4D Others Human 人 SEMA4D / CD100 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-羟基shēng huà shì jì容量：100克

EB病毒转化的人B细胞;KMY1036酒精元，英文名或英文缩写：Nigrosine alcohol soluble，级别：超，98%，规格

转基因元件CaMV35S启动子探针法qPCR试剂盒50次人肾透明细胞腺癌细胞;786-O [786-0]5-FAM ；5-羧基荧光素质量规格：>95%5-Carboxyfluorescein

HepG2/2-15细胞，人肝癌细胞 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,RAW 264.7细胞 大耳山羊皮肤细胞;LDG-3色素(水溶)质量规格：BSNigrosine water soluble

MCF-7(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2色素(醇溶）质量规格：BSNigrosin alcohol soluble

Promocell C-22111 Endothelial Cell GrowthMedium 2 KIT, 内皮细胞生长培养基2型套装 500ml7-羟基;伞形花内酯（标准品）质量规格：GC≥98%，标准品7-Hydroxycoumarin

人真皮成纤维母细胞-胎儿HDF-f6,7,8,9脱氢帕潘立酮盐酸盐质量规格：美国进口6,7,8,9 Dehydro Paliperidone Hydrochloride

PCR反应五要素： 

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G C含量以40-60%为宜，G C太少扩增效果不佳，G C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！