服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因构建35S启动子-GUS基因PCR试剂盒50次	Construction of 35S promoter GUS   gene PCR kit	FSP10665

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

 

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

CEACAM5 Others Human 人 CEACAM5 / CD66e 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,3-萘二羧1(>95.0%(GC)(T))2,3-Naphthalenedicarboxylic Anhydride质量规格：>95.0%(GC)(T)

间充质干细胞培养基MSCM-prf2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2,4,6-3(pentadecafluoroheptyl)-1,3,5-triazine质量规格：>98.0%(GC)

CD33 Others Human 人 CD33 / Siglec-3 人细胞裂解液 (阳性对照) 5-(2-氨乙基氨基)-1-萘磺酸钠水合物(>98.0%(HPLC)) 5-(2-Aminoethylamino)-1-naphthalenesulfonate Hydrate质量规格：>98.0%(HPLC)

EB病毒转化的人B细胞;KMYM四溴荧光素钾盐(>85.0%(HPLC))Tetrabromofluorescein Potassium Salt质量规格：>85.0%(HPLC)

HNE1细胞，人鼻咽癌细胞 小鼠骨髓瘤细胞,FO细胞 CM-H006人肺动脉成纤维细胞完全培养基100mL溶剂红 48(>98.0%(HPLC)(T))2',4',5',7'-Tetrabromo-3,4,5,6-tetrachlorofluorescein质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

Promocell C-27437 Preadipocyte DiffereiationMedium KIT, 前脂肪细胞分化培养基套装 500mlD-岩藻糖质量规格：>98%,日本进口原装D-(+)-FUCOSE

小鼠心肌细胞MCMN-乙酰-DL-丝氨酸质量规格：>98%,BRN-Acetyl-DL-Serine

EFNA5 Others Canine 狗 Ephrin-A5 / EFNA5 人细胞裂解液 (阳性对照) 玉米素质量规格：>98%,BRZeatin

人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2水飞蓟素质量规格：水飞蓟素UV 80%；单宾30%Silymarin

NCI-H446细胞，人小细胞肺癌细胞 大鼠神经胶质瘤细胞,C6细胞 CM-H111人成骨细胞完全培养基100mL坎地沙坦酯（标准品）质量规格：UV法含量测定Candesartan cilexetil

大鼠小脑颗粒细胞完全培养基 100mL5′-CMP5′- 胞苷酸15KUBR，99%

SNU-638人胃癌细胞 Human gasic cancer cells SNU-638 1640+10% FBS碳醋铜;碳醋铜;盐基性碳醋铜 Coppqr ccronctq;Cupric subccronctq;Coppqr ccronctq bcsic 1069-69-1

IFNB1 Protein Human 重组人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 标签)Saikos

转基因构建35S启动子-GUS基因PCR试剂盒50次CASK Others Human 人 CASK Kinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 5-溴-4-录-3-吲哚基-N-乙酰-β-D-基半乳糖苷，英文名或英文缩写：X-GalNAc，级别：BR，10u/ul，规格：1克

猪肾细胞;PK(15)1，1-二醌亚安 1,1'-DIcNTHRIMIDq 8--4

BRL 3A细胞，大鼠肝细胞 人转移胰腺癌细胞,AsPc-1细胞 CM-R109大鼠脑成纤维细胞完全培养基100mL无水流醋锰 Mcngcnqsq sulphctq 7782-87-7

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化);PC-12(低分化)结晶录化铝，英文名或英文缩写：Alumium chloride hexahydrate，级别：AR，99.5%，规格：5克

IL20RA Others Human 人 IL20Rα 人细胞裂解液 (阳性对照) LevineEMB琼脂NA

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。