特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增与其他植物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
产品名称:转基因构建35S启动子-WMVII基因染料法qPCR试剂盒50次
英文名称:Construction of 35S promoter wmvii gene qPCR kit by dye method
产品规格:50次
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N 2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
以下是公司正在热销的产品:
角膜上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)2-代-5'-乙基酰胺基腺苷2-Iodo-5'-ethylcarboxamido Adenosine 质量规格:美国进口
PRELP Others Human 人 PRELP 人细胞裂解液 (阳性对照) 瑞加德Regadenoson 质量规格:美国进口
人食管癌细胞;EC1095-氮胞苷/阿扎胞苷(标准品)Azacitidine (5-Azacytidine)质量规格:HPLC>98%,标准品
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆); EPO-CHO-T 瘤细胞,EL4细胞 RMC细胞,大鼠脑膜细胞盐酸氮卓斯汀Azelastine HCl质量规格:度>98%,BR,可用于细胞培养
人胚肺成纤维细胞;HFL1盐酸氮卓斯汀(标准品)Azelastine HCl质量规格:HPLC≥98%,标准品
Raji,人Butt's瘤细胞N-油酰-D-赤-鞘氨醇质量规格:美国进口D-erythro-Sphingosine, N-Oleoyl-
人结直肠腺癌细胞;COLO 320DM [COLO320DM] 大鼠肾小管上皮细胞完全培养基 100mLD-赤-鞘氨醇C-20质量规格:美国进口D-erythro-Sphingosine C-20
MLTC-1 小鼠间质细胞瘤细胞L-苏型-鞘氨醇C-18质量规格:美国进口L-threo-Sphingosine C-18
EDA2R Others Human 人 EDA2R / XEDAR / TNFRSF27 人细胞裂解液 (阳性对照) C16 神经酰胺(N-十六烷酰鞘氨醇,D-赤)质量规格:美国进口C16 Ceramide (N-Palmitoylsphingosine, D-erythro)
小鼠垂体瘤细胞;GT1-1二氯酞菁锡(IV)质量规格:Tin(IV) Phthalocyanine Dichloride
A673细胞,横纹肌瘤细胞 人非小细胞肺癌细胞,NCI-H838细胞 CL-0460U14-GFP(小鼠子细胞)5×106cells/瓶×2日落黄FCF,英文名或英文缩写:Sunset Yellow FCF,级别:FMP,75%,规格:100克
中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K12-氧代-1-基炳晴 2-OXO-1-PYRROLIDINqPROPIOnitnILq 7663-76-2
FGFR2 Others Human 人 FGFR2 人细胞裂解液 (阳性对照) N-苄氧羰基-L-谷酰,英文
转基因构建35S启动子-WMVII基因染料法qPCR试剂盒50次大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106D-AlanineD-2-基5克BR,99%
CDH4 Others Human 人 R-Cadherin / CDH4 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-硼醋 2-Thiophqnqboronic ccid 6162-68-0
人扁桃体上皮细胞HTEpiCCobalt(II,III)oxide氧化钴100克CP
HA Others H5N9 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) wo7iumxy7noXIDEBEADS,珠子试剂级小直径白色珠子RT不sigma
雪羊皮肤细胞;SSHS1(Earle’s平衡盐)
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G C含量以40-60%为宜,G C太少扩增效果不佳,G C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!