服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因构建FMV启动子-PVY基因染料法qPCR试剂盒50次	Construction of FMV promoter PVY   gene dye qPCR Kit	FSP10650

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

 

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

GHR2 金黄地鼠肋骨来源细胞三七皂苷R2(S型)(标准品)S-Notoginsenoside R2质量规格：HPLC≥90%，标准品

CM-M030小鼠肠粘膜上皮细胞完全培养基100mL无水醋酸锌Zinc acetate质量规格：AR

HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞5-氟吲哚-2-羧酸5-Fluoroindole-2-carboxylic acid质量规格：>98%,原装进口

EB病毒转化的人B细胞;KMY0911 人皮下脂肪细胞完全培养基 100mL3-环戊基-L-丙氨酸3-Cyclopentane-L-alanine质量规格：>98%,BR

角膜上皮细胞培养基CEpiCMSEA-0400SEA0400质量规格：>98%,钠离子-钙离子交换子（NCX）抑制剂

RBE细胞，人胆管癌细胞 小鼠艾氏腹水瘤细胞,ECA细胞 人羊膜上皮细胞盐酸阿扎司琼质量规格：>98.5%,BRAzasetron HCl

M14(人色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2氮卓斯汀碱质量规格：>97%Azelastine base

NHEK.f pooled Pellet 正常人表皮角质细胞团块(少年者，混合来源) > 1 mio.cells 内皮细胞培养基ECM杆菌肽锌质量规格：≥60U/mg,USP,BR，可用于细胞培养Bacitracin Zinc

CL-0430RS1(大鼠皮肤成纤维样细胞)5×106cells/瓶×2阿魏酸钠质量规格：>99% ferulic

IL22RA1 Others Canine 狗 IL22RA1 / IL22R 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿魏酸钠(标准品)质量规格：HPLC>99%(干品),标准品 ferulic

IL18BP Others Mouse 小鼠 IL18BP 人细胞裂解液 (阳性对照) H295EstersilH295硅酯500毫升BR，99%

MTT细胞活力和增殖检测试剂盒MTT4-羌基本加醋丁酯;队羌基本加醋丁酯;泥泊金丁酯 Butyl 4-xy7noxybqnzoctq;4-xy7noxybqnzoic ccid butyl qstqr;Butobqn;Nipcgin;Butylpcrcbqn;Butyl chqMosqpt;Butyl pcrcsqpt 1994/6/8

CD2 Others

转基因构建FMV启动子-PVY基因染料法qPCR试剂盒50次幼蚊细胞;C6/364-丁氧基邻苯二甲腈(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)4-Butoxyphthalonitrile

SELE Others Human 人 E-Selectin / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-二亚氨基异吲哚啉(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)1,3-Diiminoisoindoline

人羊膜细胞;WISH4,5-二氯邻苯二甲腈(>98.0%(GC)(N))质量规格：>98.0%(GC)(N)4,5-Dichlorophthalonitrile

CD3D Others Mouse 小鼠 CD3d / CD3 delta 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-十二烷氧基邻苯二甲腈(>99.0%(GC))质量规格：>99.0%(GC)4-Dodecyloxyphthalonitrile

人尿道上皮细胞完全培养基 100mL4-叔丁基杯[4]芳烃(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[4]arene

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。