产品名称：转基因品系玉米Event CBH-351 PCR试剂盒50次

英文名称：Event cbh-351 PCR kit for transgenic maize

产品规格：50次

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增与其他植物没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

PCR实验步骤：

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

使用方法:

一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

8. 如果有N个样品，必须设置N 2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。

9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。

PCR反应五要素： 

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G C含量以40-60%为宜，G C太少扩增效果不佳，G C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

以下是公司正在热销的产品：

小鼠单核巨噬细胞;J774A.1米诺地尔（硫酸盐）敏乐啶(标准品)Minoxidil Sulfate质量规格：HPLC>98%,标准品

IL6R Others Mouse 小鼠 IL6RA / CD126 人细胞裂解液 (阳性对照) MQAE(氯离子荧光探针)N-(Ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium bromide质量规格：进分

人T瘤转基因细胞;Jurkat D,E特立氟胺A771726 (Teriflunomide)质量规格：>99%,二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)抑制剂

BCAM Others Mouse 小鼠 BCAM 人细胞裂解液 (阳性对照) 当归酰基戈米辛H(标准品)Angeloylgomisin H质量规格：HPLC≥96%,标准品

CW-2 人结肠癌细胞美曲勃龙(R-1881)Methyltrienolone质量规格：>98%,BR

猫肾细胞;CRFKO-叔丁基-L-丝氨酸质量规格：度98%,BRO-tert-Butyl-L-serine

ADAM15 Others Human 人 ADAM15 / MDC15 人细胞裂解液 (阳性对照) Idelalisib;CAL101质量规格：>99%,选择性p110δ抑制剂CAL-101 (GS-1101)

CL-0395NCI-H2227(人小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2O-叔丁基-L-苏氨酸质量规格：98%,BRO-tert-Butyl-L-threonine

METAP1D Others Human 人 MAP1D / Mine Aminopeptidase 1D 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N-乙酰-D-色氨酸质量规格：0.98N-Acetyl-D-tryptophan

人前脂肪细胞-皮下总RNAHPA-s NAD-酪氨酸甲酯盐酸盐质量规格：0.99H-D-Tyr-OMe·HCl

CD276 Others Rat 大鼠 B7-H3 / CD276 人细胞裂解液 (阳性对照) 刚果红试纸shēng huà shì jì容量：100克

肠平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2,2-二安 2,2'-DIPYRIDYLcMINq 10-34-

Hep3B细胞，肝癌细胞 人Hela细胞耐药亚株(Hela/DDP),Hela细胞 人羊膜上皮细胞cDNAHAmEpiC cDNA三羟甲基基shēng huà shì jì容量：2～8℃1毫克

恒河猴胚肾细

转基因品系玉米Event CBH-351 PCR试剂盒50次人EB病毒转化的B细胞;CGM1 人尿道上皮细胞完全培养基 100mLD-果糖-6-1酸二钠盐质量规格：>95%,BRD-Fructose-6-phosphate di salt

人心脏微血管内皮细胞RNAHCMEC miRNA5 μg白头翁皂苷B质量规格：HPLC≥98%，标准品Pulchinenoside B

VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羟基羽扇豆20(29)-1-28–酸;白头翁皂苷D质量规格：HPLC≥98%，标准品V

大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-1罗汉果皂苷Iva质量规格：HPLC≥98%，标准品Mogroside IVa

PA319细胞，人大肠癌细胞 人视网膜色素上皮细胞,D407细胞 人前列腺癌细胞;PC-3 [PC3]3A-氨基-3A-脱氧-(2AS,3AS)-β-环糊精水合物(>97.0%(T))质量规格：>97.0%(T)3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-β-cyclodextrin Hydrate