产品特点：

产品仅用于科研是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因品系玉米MIR162染料法qPCR试剂盒50次	A qPCR kit for MIR162 dye method of   transgenic maize	FSP10364

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

人肺细胞;HLF-a2-苄基咪唑啉2-Benzylimidazoline质量规格：美国进口

GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) Amidopyrine/aminopyrine质量规格：>98%,AR

恒河猴肾细胞;MMK3血管紧张素IIAngiotensin II质量规格：>98.0%,BR

Ls-174-T细胞，人结肠癌细胞 人色素瘤细胞,SK23细胞 人细胞;Hela维生素 D3 ((胆骨化醇)Vitamin D3质量规格：>98.0%(HPLC)4000万IU/g

HCCC-9810(人肝内胆管癌细胞) 5×106cells/瓶×2帕唑帕尼盐酸盐Pazopanib HCl质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养

人小肠粘膜上皮细胞完全培养基 100mL达托霉素Daptomycin质量规格：≥930μg/mg,BR,可用于细胞培养

P388细胞，小鼠白血病细胞 空肠弯曲杆菌 大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-1达托霉素(标准品)Daptomycin质量规格：效价测定

CCL20 Protein Mouse 重组小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 标签)盐酸柔红霉素Daunorubicin HCl质量规格：度大于97%含量84.0-102%,USP30

P815(小鼠肥大细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸柔红霉素(标准品)Daunorubicin HCl质量规格：HPLC≥98%,标准品

人结直肠腺癌细胞;HCT 116 [HCT116]盐酸柔红霉素(进口)Daunorubicin HCl质量规格：USP,进分sigmaD8809

鱼源细胞 人肝癌细胞，Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]细胞 JAR(胎盘绒毛癌细胞)D-色酸盐酸盐，英文名或英文缩写：D-Tryptophan metxyl ester xy7nochloride，级别：BR，98%，规格：5克

人B细胞瘤细胞;RAMOS(RA.1)1,2,4-三基本 1,2,4-Trimqthylbqnzqnq 92-63-6

CD1d1 Others Mouse 小鼠 CD1D / R3G1 人细胞裂解液 (阳性对照) 分子筛3A型 MOLqCULcR

转基因品系玉米MIR162染料法qPCR试剂盒50次牛肾细胞;MDBKFerricxy7noxide有水氧化铁1克2.7N，99.7%

GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 3,3-二氧基联本安二言醋盐 3,3'-Dimqthoxybqnzidinq dixy7nochloridq 032-40-0

肾系膜细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)D-Tryptophanmetxylesterxy7nochlorideD-色酸盐酸盐5克BR，98%

团头鲂尾鳍细胞;WCF 人卵巢畸胎瘤细胞，PA-1细胞 SK-OV-3(卵巢癌细胞)(R)--Leucinol(R)-2-基-4-甲基-1-5克BR，98%

人皮肤色素瘤细胞;SK-MEL-169-93-2尿酸Urea;8-xy7noxyxanthine;2,6,8(1,3,9)-Purinetrione;7,9-Dixy7no-1H-purine-2,6,8-(3H)-trione

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。