服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因品系玉米T14染料法qPCR试剂盒50次	Dye qPCR kit for transgenic maize   T14	FSP10343

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

LOVE1细胞，结直肠癌细胞 人色素瘤细胞,B16细胞 EB病毒转化的人B细胞;HH-29巴马汀氯化物一水合物(分析标准品)Palmatine chloride hydrate质量规格：分析标准品

HCC827(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2BSA[=N,O-双(三甲基硅基)乙酰胺](>75.0%(GC))N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide质量规格：>75.0%(GC)

ARSA Others Human 人 ARSA / Arylsulfatase A 人细胞裂解液 (阳性对照) BSTFA[=N,O-双(三甲基硅基)三氟代乙酰胺](>95.0%(GC),用于气相色谱)

人肝细胞;HL-7702[L-02]N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide质量规格：>95.0%(GC)

MS4A1 Others Ferret 雪貂 CD20 / MS4A-1 人细胞裂解液 (阳性对照) TMS-咪唑(=N-三甲基硅基咪唑)(>98.0%(T))TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)质量规格：>98.0%(T)

人支气管平滑肌细胞cDNAHBSMC cDNABOC-L-天冬酰胺质量规格：≥98.5%,BRBoc-Asn-OH

小型猪肾细胞;MPK 畸胎癌细胞，P19细胞 W256细胞，Walker氏癌肉瘤256瘤株Boc-L-谷氨酰胺质量规格：>98.5%,BRBoc-Gln-OH

Sars结构蛋白表达株;293 001ABoc-L-丙氨酸 N-丁二酯质量规格：BRBoc-Ala-OSu

HA Others H5N3 甲型流感 H5N3 (A/duck/Hokkaido/167/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) BOC-D-丙氨酸质量规格：>98.5%,BRBoc-D-Ala-OH

CL-0240V79(仓鼠肺细胞)5×106cells/瓶×2BOC-L-天冬氨酸质量规格：>98.5%,BRBoc-Asp-OH

肺成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)DEAE葡聚糖凝胶A-50shēng huà shì jì容量：5KU

MET Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 亚油酸 Methyl linoleate,≥99% 112-63-0 1G 通用试剂

人成骨肉瘤细胞;MG-63肝速酶I(-20°C) HqPcRINcSq 902-39-

豚鼠心肌细胞;GP-H1 EBV 转化的绒猴白细胞，B95-8细

转基因品系玉米T14染料法qPCR试剂盒50次SW1990细胞，人胰腺癌细胞 人胸膜瘤细胞,SMC-1细胞 杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7E74-乙酰氧基它莫西芬质量规格：美国进口4-Acetoxy Tamoxifen

HUVEC(HUV-EC-C) (人脐静脉血管内皮细胞) 5×106cells/瓶×2N-去甲基-4-羟基它莫西芬-d5 (1:1 E/Z 混合物)质量规格：美国进口N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen-d5 (1:1 E/Z Mixture)

Promocell C-22022 Endothelial Cell GrowthMedium MV2, 内皮细胞生长培养基MV2(即用型) 500ml(Z)-4-羟基-N-去甲基它莫西芬 (同分)质量规格：美国进口(Z)-4-Hydroxy-N-desmethyl Tamoxifen (mixture of isomers)

人生发基质细胞裂解物HHGMCLN-去甲基-4-羟基它莫西芬 (大约1:1 E/Z 混合物)质量规格：美国进口N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen (approx. 1:1 E/Z Mixture)

IL17RB Others Human 人 IL17RB / IL-17 Receptor B 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (1R,4R)-N-去甲基盐酸舍曲林质量规格：美国进口(1R,4R)-N-Desmethyl Sertraline Hydrochloride

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。