特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增与其他植物没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

产品名称：转基因品系棉花WideStrike染料法qPCR试剂盒50次

英文名称：A qPCR kit for transgenic cotton by widestrike dye method

产品规格：50次

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

PCR实验步骤：

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

使用方法:

一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

8. 如果有N个样品，必须设置N 2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。

9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。

以下是公司正在热销的产品：

SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人细胞裂解液 (阳性对照) 布地奈德-d8Budesonide-d8质量规格：美国进口

EJ 人膀胱癌细胞6α-羟基布地奈德6α-Hydroxy Budesonide质量规格：美国进口

SW1116人结肠腺癌细胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培养基(GIBCO)+10%FBS6β-羟基布地奈德6β-Hydroxy Budesonide质量规格：美国进口

CD70 Protein Rat 重组大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 标签)亚叶酸钙水合物Folinic acid calcium salt hydrate质量规格：美国进口

人脂肪细胞-内脏(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC来源), 人癌细胞 Human喜树碱钠盐 Camptothecin质量规格：美国进口

小鼠胚胎成纤维细胞;MEF内消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC))质量规格：>92.0%(HPLC)meso-Tetraphenylchlorin

HAVCR1 Others Mouse 小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)

真皮微血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine

RPS6KA2 Others Human 人 RSK3 / RPS6KA2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1,3-Diphenyl-1,3-propanedione

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A三溴新戊醇质量规格：>97%Trisbromoneopentyl Alcohol

NRG1 Protein Human 重组人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签)前列腺酸性嶙酸酶测试盒500支/包

M-NFS-60 (小鼠白血病细胞G-CSF依赖性) 5×106cells/瓶×2 肾系膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)哌拉西林 Piperacillin 61477-96-1 5G 通用试剂

人Butt瘤细胞;RAJI过氧化轻30%(*);二氧化轻;二氧化二轻 xy7nogqn Pqroxidq Concqntrc

转基因品系棉花WideStrike染料法qPCR试剂盒50次人成纤维细胞总RNAHLF NA本亚磺酸钠5毫克

CD79B Others Rat 大鼠 CD79B / B29 人细胞裂解液 (阳性对照) 2，3-二溴炳醇 2,3-Dibromo-1-propcnol 96-13-9

人椎间盘髓核细胞完全培养基 100mL十二醇25克

VERO C1008 (E6)细胞，非洲绿猴肾细胞 CHO/dhFr-(中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞) 小鼠T瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVA抗生素Ⅲ号培养基25克

EFNB2 Protein Canine 重组狗 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)4298-52-62-乙炔2-Ethynylthiopxene

PCR反应五要素： 

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G C含量以40-60%为宜，G C太少扩增效果不佳，G C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！