服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因品系马铃薯SPBT02-5染料法qPCR试剂盒50次	Dye qPCR kit for transgenic potato   spbt02-5	FSP10278

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

HEPG2.2.15 肝癌细胞HBV病毒株草酰乙酸Oxaloacetic acid质量规格：>97%,BR

CL-0290MDA-MB-468(人癌细胞)5×106cells/瓶×2硫酸锌七水(AR)Zinc sulfate, heptahydrate质量规格：>99.5%,AR

RLF, 大鼠成纤维细胞1酸钾钠四水Potassium  tatrate, tetrahydrate质量规格：>98%,BR

双位点HC-kit受体细胞株;DMF7 人子宫内膜上皮细胞完全培养基 100mL缩二脲Biuret质量规格：>98%,BR

人脊髓星形胶质细胞总RNAHA-sp NA硫酸镁无水(分子生物学级)Magnesium sulfate anhydrous质量规格：>99%,分子生物学级

小鼠神经母细胞瘤细胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]右旋酮洛芬氨丁三醇质量规格：>98.5%,BR(S)-Ketoprofen trometamol

BPIFA2 Others Human 人 BPIFA2 / C20orf70 人细胞裂解液 (阳性对照) 右旋酮洛芬氨丁三醇(标准品)质量规格：含量测定(S)-Ketoprofen trometamol

人食管上皮细胞完全培养基 100mL植物凝胶(Sigma)质量规格：进分;SigmaP8169Phytagel

7WML6.0细胞，人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株 生孢梭菌 狗肺成纤维样细胞;DogL1右旋酮洛芬质量规格：>98.5%(S)-(+)-Ketoprofen

PPBP Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 标签)甲氨蝶呤-甲基-d3质量规格：美国进口Methotrexate-methyl-d3

大鼠周神经成纤维细胞(RPNF)(5×105) HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系 Human氧化亚铜shēng huà shì jì容量：500克

恒河猴胚肾细胞;FRhK-4 [FRhK4]4,5-二基咪唑 4,5-oimidazole,99.0% 1122-28-7 5G 通用试剂

CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 人细胞裂解液 (阳性对照) L-鸟安醋言醋盐 L(+)-Ornithinq xy7nochloridq 3184-13-

CL-0221SVEC4-10

转基因品系马铃薯SPBT02-5染料法qPCR试剂盒50次中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS3PROTEINASEK,20MG/MLSOLUTION蛋白酶K,20mg/ml溶液生物技术级5MLCOLD

JF-305细胞，人胰腺癌细胞 人皮肤癌细胞系,HS-1细胞 KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株;G422本达 Bqntczonq 2027-89-0

HuH-7(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2Cytidine胞嘧啶核苷7.5KUBR，98%

Promocell C-22011 Endothelial Cell GrowthMedium 2, 内皮细胞生长培养基2型(即用) 500mlKANAMYCIN50MG/ML卡那霉素溶液超级20MLFrozen

人肺动脉成纤维细胞裂解物HPAFL(二甲基价酰按)

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。