服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品名称	英文名称	货号
转基因品系甜菜GISB77染料法qPCR试剂盒50次	Dye qPCR kit for transgenic Sugarbeet   strain gisb77	FSP10253

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

CM-H091人大隐静脉内皮细胞完全培养基100mL醋酸高(>95%,BC)Lead (IV) acetate质量规格：>95%,BC

GH3, 大鼠垂体生长激素腺瘤粉(>99%,BC)Lead powder质量规格：>99%,BC

人癌细胞;MDA-MB-435S 人视网膜微血管内皮细胞完全培养基 100mL碱式碳酸(>99%,BR)Lead(II) carbonate basic质量规格：>99%,BR

人结肠平滑肌细胞总RNAHCSMC NA雷氏曼着色剂Leishman's stain质量规格：BS

PVRL2 Others Rat 大鼠 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人细胞裂解液 (阳性对照) 来普霉素B 1%溶液Leptomycin B 1% soluton质量规格：>95%(HPLC),BC

雪羊皮肤细胞;SSHS1知母皂苷元质量规格：HPLC≥98%，标准品Sarsasapogenin

VCL Others Human 人 VCL / Vinculin 人细胞裂解液 (阳性对照) 4'-去甲鬼臼质量规格：标准品,用于含量测定4'-Demethylpodophyllotoxin

木瓜蛋白酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL杠柳毒苷质量规格：HPLC≥98%，标准品Periplocin

BEL-7402人肝癌细胞 BEL-7402 human hepatocarcinoma cells 1640+10% FBS1,2-二亚油酰甘油质量规格：美国进口原装1,2-Dilinoleoylglycerol

IL34 Protein Mouse 重组小鼠 IL-34 蛋白 (His 标签)毛地黄毒苷配基质量规格：>97.0%(LC),原装进口Digitoxigenin

滑膜细胞培养基SMIEFCATHODEBUFFER,20XIEF阴极缓冲液, 20X蛋白组学级透明淡黄色液体RTsigma

PRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人细胞裂解液 (阳性对照) 1，3-本二流醇 1,3-BqNZqNqDITHIOL 66-04-0

人细胞;1301三拂醋工 Mqrcuric trifluoroccqtctq 1327-21-7

大鼠胰岛细胞瘤细胞;INS-1 神经上皮瘤细胞，SK-N-MC细胞 MPC细胞，小鼠垂体细

转基因品系甜菜GISB77染料法qPCR试剂盒50次大鼠脑胶质瘤细胞;C6SDS(wo7iumDODECYLSULFATE),10%SOLUTIONSDS溶液超级透明无色液体RTsigma

杂交瘤(B类);Z1510C6D10F4G6 小鼠脉络膜血管细胞完全培养基 100mL二异脲酸钠  dichloroisocyanurate,96% 2893-78-9 100G 通用试剂

HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞 Humanα-1,6 葡聚糖 GLYCOGqN 9002-79-

EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人细胞裂解液 (阳性对照) 粘液素II，英文名或英文缩写：Mucin，级别：BR，200u/mg，规格：1公斤

人红系白血病细胞;TF-1姆沙伯 W NAWChromosorb W-NAW

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。