上海抚生实业有限公司
产品名称：人类白细胞抗原A（HLA-A）基因探针法荧光定量PCR试剂盒50次
英文名称：Human leukocyte antigen A (HLA-A) gene probe fluorescent quantitative PCR kit
产品规格：50次
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增与其他植物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N 2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
PCR反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2
引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G C含量以40-60%为宜，G C太少扩增效果不佳，G C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
以下是公司正在热销的产品：
Antibacterial Protein LL-37 (human) Leptin (22-56) (human) D-VLR-pNA Kinetensin IGF-I (30-41), IGF-I C-Peptide
Antibacterial Protein LL-37 amide (human) (18- 29) (Dab7)-Leiurotoxin I pFR-pNA K-Myosin Light Chain (11-23) amide IGF-I (24-41)
Leumorphin (porcine) Leiurotoxin I PFR-AMC (Val6,Ala7)-Kemptide IGF-I (1-3)
Leucopyrokinin (4-8) YIGSR amide Cyclohexylacetyl-FRSVQ-NH2 (Trp4)-Kemptide, Chocktide IGF-I Analog
Leucopyrokinin, LPK Laminin β -1 Chain (929-933) (human, mouse), YIGSR Bz-IEGR-pNA Kemptide H-Asn-Pro-Glu-Tyr(PO3H2)-OH
人血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Angiotensin-2 Human Ang-Ⅱ(Angiotensin Ⅱ) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组Ang-Ⅱ浓度。
人干细胞生长因子受体(SCFR)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:proto-oncogene c-Kit,tyrosine-protein kinase Kit,CD117,KIT,PBT, KIT proto-oncogene receptor tyrosine kinase,Piebald trait protein,p145 c-kit,v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog,CD_antigen: CD117 Human SCFR(Stem Cell Growth Factor Receptor) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组SCFR浓度
人原纤维蛋白1(FBN1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FBN1, ACMICD, ECTOL1, FBN, GPHYSD2, MASS, MFS1, OCTD, SGS, SSKS, WMS, WMS2 Human FBN1(Fibrillin 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组FBN1浓度
GENERULER 100BP DNA LADDER,Ready-to-use 50ug 核酸凝胶电泳和印迹
GENERULER 100BP DNA LADDER,Ready-to-use 5x50ug 核酸凝胶电泳和印迹
PHIX174 DNA/BSURI(HAEIII) marker 50ug 核酸凝胶电泳和印迹
PHIX174 DNA/BSURI(HAEIII) marker 5x50ug 核酸凝胶电泳和印迹
PHIX174 DNA/BSURI(HAEIII) marker, ready-to-use 50ug 核酸凝胶电泳和印迹
人类白细胞抗原A（HLA-A）基因探针法荧光定量PCR试剂盒50次羊源性成分(Ovine)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法) 48T/盒 动物源性成分
鸡源性成分(Chicken)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法) 48T/盒 动物源性成分
鸭源性成分(Duck)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法) 48T/盒 动物源性成分
鹅源性成分(Goose)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法) 48T/盒 动物源性成分
鹿源性成分(Deer)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法) 48T/盒 动物源性成分
