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禽轮状病毒A组RT-LAMP试剂盒50次

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上海抚生实业有限公司
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特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

产品名称:禽轮状病毒A组RT-LAMP试剂盒50次

英文名称:Avian Rotavirus Group A(ARV-A)

产品规格:50次

产品保存:-20℃保存

产品有效期:一年

储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。

运输:低温、避光,快递免费送货上门。

图片1.jpg
特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增与其他植物没有交叉反应。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

PCR实验步骤:

①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

使用方法:

一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)

1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。

3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。

4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。

9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。

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ANKRD26 英文名称: 锚蛋白重复结构域蛋白26抗体 0.2ml

ACY3 英文名称: 丙型肝炎病毒核结合蛋白-1抗体 0.2ml

ARSK 英文名称: 芳香基硫酸酯酶K抗体 0.2ml

Amphiphysin 英文名称: 神经元突触前膜蛋白抗体 0.2ml

Ankyrin G 英文名称: 锚定蛋白G抗体 0.2ml

Actin 英文名称: 肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体 0.1ml

ADAMTS1 英文名称: 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型抗体 0.1ml

ADAMTS7(NT) 英文名称: 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 (N端抗体) 0.1ml

ADAMTS7 英文名称: 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 0.1ml

beta Adducin 英文名称: 内收蛋白抗体 0.1ml

ADFP 英文名称: 脂肪组织分化相关蛋白抗体 0.1ml

Adiponectin Receptor 1 英文名称: 脂联素受体1抗体 0.2ml

ADM R 英文名称: 肾上腺髓质素受体抗体 0.1ml

Adiponectin 英文名称: 脂联素抗体 0.1ml

ADM 英文名称: 肾上腺髓质素抗体 0.1ml

Adenosine A3 Receptor 英文名称: 腺苷受体A3抗体 0.1ml

ADRA2 英文名称: ADRA2肾上腺素能受体2抗体 0.1ml

ADRB1 英文名称: 肾上腺素能受体β1抗体 0.1ml

ADRB2 英文名称: 肾上腺素能受体β2/β2-AR抗体 0.1ml

AGEs 英文名称: 晚期糖基化终末产物抗体 0.1ml

禽轮状病毒A组RT-LAMP试剂盒50次Aggrecan1 英文名称: 软骨蛋白聚糖抗体 0.1ml

ALAS-E 英文名称: 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗体 0.2ml

ASPP1 英文名称: p53凋亡刺激蛋白1抗体 0.1ml

PCR反应五要素: 

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。


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