还原型谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合,含有巯基的三肽,具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为谷胱甘肽活性基团(故谷胱甘肽常简写为G-SH),易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、芥子气,铅、汞、砷等重金属)等结合,而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽(尤其是肝细胞内的谷胱甘肽)能参与生物转化作用,从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质,排泄出体外。谷胱甘肽还能帮助保持正常的免疫系统的功能
还原型谷胱甘肽作为体内一种重要的抗氧化剂,能够清除掉人体内的自由基;由于GSH本身易受某些物质氧化,所以它在体内能够保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基不被有害物质氧化,从而保证蛋白质和酶等分子生理功能的正常发挥;人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多,这对保护红细胞膜上蛋白质的巯基处于还原状态,防止溶血具有重要意义谷胱甘肽检测方法较多,比较常用的有碘量法、DTNB(Ellman试剂)法、亚硝基铁氰化钠法、荧光法、四氧嘧啶法和高效液相色谱法( HPLC)。上述方法各有优点,在检测GSH含量时可根据实际情况,选择适合、灵敏、精确的检测方法 [9] 。
DTNB比色法
原理:DTNB与谷胱甘肽的巯基反应生成黄色的5 - 硫代 - 2 - 硝基苯甲酸,在412 nm波长处有最大吸收峰,而DTNB在400nm以上几乎没有吸收峰。向含有谷胱甘肽的试样中加入少量的DTNB,将反应液在412 nm处测定吸收值,根据吸收值的大小即可求得谷胱甘肽含量 。
方法步骤:
1、DTNB贮存液配制:将0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0)中形成DTNB贮存液 [9] 。
2、DTNB分析液配制:将DTNB贮存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl缓冲液稀释100倍,配成DTNB分析液,避光放置,现配现用 [9] 。
3、操作步骤:取谷胱甘肽标准品溶液或待测样品溶液(0.1 ~ 3.0 mol/L)0.5 mL,加入到1.5 mL浓度为0.15 mol/L的NaOH溶液中,再加入3%的甲醛溶液05mL,在pH8.0、25℃下反应2 min,反应结束后,取反应液0.5 mL加入DTNB分析液,在25℃下反应5 min,于波长412 nm下测定吸收值。根据两者的吸光度,计算差值,代入标准曲线,计算出谷胱甘肽的含量
生理功能
解毒作用:与毒物或药物结合,消除其毒性作用 [5] ;
参与氧化还原反应:作为重要的还原剂,参与体内多种氧化还原反应 [5] ;
保护巯基酶的活性:使巯基酶的活性基团—SH维持还原状态 [5] ;
维持红细胞膜结构的稳定:消除氧化剂对红细胞膜结构的破坏作用