完整的elisa试剂盒主要的组成成份如下:
1、已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
2、C的抗原或抗体(结合物);
3、酶的底物;
4、阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
5、结合物及标本的稀释液;
6、洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
7、酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的zui终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
产品名称
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英文名称
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货号
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大鼠TSG-6 elisa检测试剂盒—A107206
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Rat tumor necrosis factor-inducible gene 6 protein,TSG-6 elisa kit
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A107206
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实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中AIF水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入AIF抗原、生物素化的抗小鼠AIF抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的AIF呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
注意事项:
1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须注意安全。
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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