细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。

 

在不加任何物质的条件下，直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。若向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水分在冻结前透出细胞。储存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的-5~0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油。

 

在细胞的冻存与复苏过程中，有如下事项需要注意。 

1、不要在细胞状态不好时，进行细胞冻存。如，长的太过了，培养液已经很黄了；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变。应该在增殖旺盛，情况稳定，实验效果良好，复苏后两周内进行细胞冻存。
 

2、冻存时细胞浓度低于1-5 ×106个/ml，很难复苏成功，应该离心后调整细胞浓度。
 

3、一定要选择原配的管子和盖子（不同牌子/型号的颜色会有差别），冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。
 

4、尽量选择程序冷冻盒进行细胞冻存。如果没有，应选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。防止放在-80℃的冻存盒，壁太薄，细胞被迅速降温。确保“缓降”。
 

5、冻存的细胞应尽快转入液氮，不要在-80℃冰箱放置超过一个月。
 

6、防止找不到或拿错细胞，每只冻存管都应标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。
 

7、取细胞时应做好防护措施，带好防冻手套，护目镜。细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
 

8、必须在1-2min内使冻存液完全融化，复苏温度太慢，会造成细胞的损伤。如果冻存管的壁较厚，隔热效果较好，可以适当提高水浴温度（37℃~40℃）。二甲亚砜（DMSO）最好选择进口产品。
 

9、提前预定超净台，减少复苏后插在冰盒里等待的时间。复苏后长时间（1h），还没有加入新的培养液。高浓度DMSO防止胞内形成冰晶，冻存时保护细胞，但复苏溶解后，浸泡时间太久会对细胞有毒性。
 

10、关于细胞溶解后，是否需要离心的问题，需要根据特定的细胞情况而定。主要有两种方式。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液（后贴壁后即换液）。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程。但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染。另一种是须离心后，将冻存液倒干净，且一定要倒干净。
 

11、对于不离心直接加入培养基培养的方法，培养基的加入量是个需要考虑的问题。主要涉及DMSO的浓度，如果你加入培养基太少，DMSO的浓度就会比较大，影响细胞生长。而加入培养基太多，又会影响细胞的贴壁效果。
 

12、DMSO的浓度在小于5%（也有说1%）的时候对一般细胞没有什么影响。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO，那么1ml的细胞加入10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
 

13、有些细胞复苏后一星期才有起色，切忌要有耐心，不要换液，耐心等待，两周后再做决定。不要复苏三四天后，细胞没有任何动静，认为失败，倒掉所有细胞。

293 [HEK-293]	人胚肾细胞
5637	人膀胱癌细胞
293A	人胚肾细胞
22RV1	人前列腺癌细胞
293T [HEK-293T]	人胚肾细胞
3T3-L1	小鼠胚胎成纤维细胞
4T1	小鼠乳腺癌细胞
6T-CEM	人T细胞白血病细胞
769-P	人肾细胞腺癌细胞
786-O [786-0]	人肾透明细胞腺癌细胞
95-D [PLA-801D]	人高转移肺癌细胞
A172	人胶质母细胞瘤细胞
A-375	人恶性黑色素瘤细胞
A-431	人表皮癌细胞
A549 [A-549]	人非小细胞肺癌细胞
A-673	人横纹肌肉瘤细胞
A9	小鼠皮下结缔组织细胞
AAV-293	人胚肾细胞
Acc-2	人涎腺腺样囊性癌细胞
ACHN	人肾细胞腺癌细胞
AGS	人胃腺癌细胞
Ana-1	小鼠巨噬细胞
Anglne	人卵巢癌细胞
AR42J	大鼠胰腺外分泌细胞
ARPE-19	人视网膜上皮细胞
AsPC-1	人转移胰腺腺癌细胞
AtT-20	小鼠垂体瘤细胞
B16	小鼠黑色素瘤细胞
BGC-823	人胃腺癌细胞（低分化）
BHK-21 [C-13]	仓鼠肾成纤维细胞
BRL 3A	大鼠肝细胞
BNL CL.2	小鼠胚胎肝细胞
BRL	大鼠肝细胞
BS-C-1	非洲绿猴肾细胞
BT-474 [BT474]	人乳腺导管癌细胞
BT-549	人乳腺管癌细胞
BxPC-3	人原位胰腺腺癌细胞
C127 [C-127]	小鼠乳腺肿瘤细胞
C2C12	小鼠成肌细胞
C-33 A	人子宫颈癌细胞
C6	大鼠胶质瘤细胞
Ca Ski	人宫颈癌上皮细胞